Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 111
1. Die Gegenwart einer fluoreszierenden Substanz innerhalb der injizierten Probe
führt zu einem normalen (positiven) Peak
2. Die Gegenwart einer nicht fluoreszierenden Probenkomponente führt zu einer
Verdrängung der fluoreszierenden Pufferionen und damit zu einem indirekten
(negativen) Peak
Darüber hinaus werden analyt-unspezifische Signale, die allgemein als Systempeaks
bezeichnet werden, beobachtet. Ihre Entstehung läßt sich auf zwei Ursachen zurückführen.
Beide Erkärungsansätze basieren auf dem Prinzip der Isotachophorese
(ITP), die neben der CZE eine weitere Unterart der Kapillarelektrophorese bildet. Die
Probe wird hierbei zwischen zwei Elektrolytlösungen mit unterschiedlicher Ionenbeweglichkeit
aufgegeben, wobei die Mobilitäten der Probenionen zwischen denen des
Leit- und Folgeelektrolyten liegen müssen. Wird ein elektrisches Feld angelegt,
ordnen sich die Probenionen entsprechend ihrer Mobilität zwischen den beiden
Puffersystemen an (ITP-Fokussierung). Nach der Trennung der Analyte aufgrund
ihrer Mobilitäten, werden sie mit einer festgesetzten Geschwindigkeit, die durch den
Leitelektrolyten bestimmt wird, durch die Kapillare transportiert. Die ITP wird heute
weniger als Trennverfahren, sondern viel mehr zur on-line Aufkonzentrierung der
Probe eingesetzt. Durch eine verminderte Leitfähigkeit innerhalb der Probenzone im
Vergleich zum Elektrolyten entsteht dort durch den erhöhten Widerstand eine
größere Feldstärke. Die Mobilität der Analyte wird hierdurch in bezug auf die Pufferionen
erhöht und die Probenbestandteile akkumulieren sich an der Grenzfläche zum
Elektrolyten aufgrund der dort wieder reduzierten Feldstärke. Die Aufkonzentrierung
läuft fort bis sich die Leitfähigkeit der Probenzone der des Elektrolyten angeglichen
hat und damit in beiden Bereichen identische Feldstärken vorliegen. Die geringere
Leitfähigkeit führt somit bei der Injektion zu einer Aufkonzentrierung der Probe, die
über das Kohlrausche Gesetz (Gl. 17) erklärt werden kann, das eine einheitliche Leitfähigkeit
über den gesamten Bereich der Trennstrecke fordert.
ci(x) ⋅zi
ω ( x)
= ∑ = konst(x)
(17)
µ
i
Dieses Gesetz gilt sowohl für starke mono- und multivalente als auch für schwache
monovalente Elektrolyte. Die Summierung wird dabei über alle an einem gegebenen