Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 61
Im allgemeinen vergrößerte sich der lineare Meßbereich mit zunehmender GOD-
Aktivität in der Membran, was auf die größere immobilisierte Enzymmenge und eine
damit verbundene Verschiebung des Substratsättigungsbereiches zu höheren
Glucose-Konzentrationen zurückzuführen war. Jedoch wurde mit ansteigender GOD-
Aktivität auch die untere Grenze des linearen Meßbereiches aus den bereits zuvor
diskutierten Gründen zu höheren ATP-Konzentrationen verschoben. Durch die
Injektion der ATP-Standards wurde daher für Elektrode 5 eine lineare Signalabnahme
von 12,1 bis 1000 µM ATP ermittelt. Als nachteilig wirkte sich die große GOD-
Aktivität jedoch auf die Sensitivität und das Detektionslimit dieser Enzymelektrode
aus. Durch den hohen Glucose-Umsatz durch die GOD-Reaktion betrug die Empfindlichkeit
des entwickelten Detektionssystems für ATP nur 9 pA/µM und wies eine
Nachweisgrenze von 28,6 µM auf, die damit im Vergleich zu Elektrode 4 mit einem
optimalen HK/GOD-Verhältnis um einen Faktor von 3,5 höher lag. Im linearen
Bereich, der von 7,8 bis 125 µM ATP reichte, besaß dieser Biosensor unter den ge-
wählten Bedingungen eine Nachweisgrenze von 8,1 µM ATP.
3.1.3 Glucose-Konzentration
Nach der Optimierung des Enzymverhältnisses (HK/GOD ≈ 1,8) wurde weiter
untersucht, welchen Einfluß die dem Carrier zugesetzte Glucose-Menge auf das
Detektionslimit und die Sensitivität bei der ATP-Bestimmung ausübte.
Stromabnahme [nA]
120
100
80
60
40
20
0
10 µM Glucose
50 µM Glucose
100 µM Glucose
500 µM Glucose
siehe Abb. 20b
0 200 400 600 800 1000
ATP-Konzentration [µM]
Abb. 20a: Einfluß der Glucose-Konzentration auf die Signalabnahme