Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 64
Puffer ohne Zusätze gelagert. Die anschließend mit einer Puffer-Glucose-Konzentration
von 50 µM aufgenommene Kalibrierkurve ist in Abbildung 22 dargestellt.
Stromabnahme [nA]
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
ATP-Konzentration [mM]
Abb. 22: ATP-Kalibrierkurve nach Lagerung von Elektrode 4, Clark & Lubs pH 8, 10 mM MgCl2, 50 µM
Glucose
Nach der Lagerung verringerte sich die Empfindlichkeit des Biosensors um 39,2%
auf 31 pA/µM, jedoch erweiterte sich der lineare Meßbereich um den Faktor 16 (0 bis
2 mM ATP). Dieser Effekt war auf eine stärkere Deaktivierung der immobilisierten
Hexokinase während der Lagerungsphase zurückzuführen, so daß sich das Aktivi-
tätsverhältnis weiter zu Gunsten der Glucose-Oxidase verschob, die als stabileres
Enzym hiervon weniger beeinflußt wurde. Wie bereits unter 3.1.2. beschrieben erweiterte
sich mit einer Verschiebung des Aktivitätverhältnisses zu Gunsten der GOD
der lineare Meßbereich, wodurch gleichzeitig jedoch die Sensitivität des Detektionssystems
herabgesetzt wurde. Dieses Phänomen wurde in diesem Fall durch die
Alterung der Elektrode hervorgerufen. Allerdings führte eine weitere Lagerung der
Elektrode über Nacht dazu, daß sie in ihrer Funktionalität fast vollständig eingeschränkt
wurde. Die entwickelten Biosensoren konnten somit über einen Zeitraum
von etwa 48 Stunden zur ATP-Bestimmung genutzt werden.
3.1.5 Bi-Enzymreaktoren
Um einen Biosensor mit möglichst höherer Empfindlichkeit als mit den verschiedenen
Enzymelektroden ermittelt zu erhalten, wurden die Enzyme über