Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 143
3.4.3.3 Optimierung der Fließgeschwindigkeit
Die bisher beschriebenen Untersuchungen im RCC-Chip wurden mit einer an
Kanal 1 angelegten Spannung von -400 V vorgenommen. Um den Einfluß der Fließgeschwindigkeit
und damit verbunden der Diffusion auf das CL-Signal zu verifizieren,
wurde das Potential an diesem Kanal variiert (Tab. 28).
Potential an Reservoir 1 CL-Signal [mV]
- 200 V 1544
- 400 V 1801
- 600 V 1568
- 1000 V 1527
Tab. 28: Einfluß der an Kanal 1 angelegten Spannung auf das CL-Signal; 1 mM Luminol, 100 µM
H2O2
Mit einer Spannung von 400 V wurde eine Fließgeschwindigkeit erzeugt , die sich als
optimal für die Detektionsreaktion erwies. Durch die Erniedrigung bzw. Erhöhung des
Potentials wurde der Fluß jeweils so beeinträchtigt, daß die CL nicht vollständig im
Bereich des Detektorfensters emittierte und damit verringerte Signale beobachtet
wurden. Auf eine weitere Optimierung der Detektorposition in Abhängigkeit von der
jeweils angelegten Spannung wurde verzichtet und alle nachfolgenden Untersuchungen
bei 400 V durchgeführt.
3.4.3.4 Xanthin-Detektion
Vor der Bestimmung von Xanthin über einen mit einer Mischung aus POD- und
XOD-Beads gepackten µ-Reaktor wurden zunächst weitere Versuche durchgeführt.
Xanthin-Bestimmung über lösliche XOD
Für erste Untersuchungen zur Xanthin-Bestimmung im RCC-Chip wurde die Kavität
ausschließlich mit POD-Beads gefüllt und die H2O2-Lösung in Reservoir 2 gegen
eine Mischung aus 10 mg/ml XOD und 1 mM Xanthin ausgetauscht. Der Assay
wurde anschließend durch Anlegen der Spannung an Kanal 1 gestartet. Eine CL-
Emission ließ sich jedoch bei diesem Ansatz auch bei einer Erhöhung der
Substratkonzentration auf 5 mM Xanthin bzw. der eingesetzten Enzymaktivität nicht