Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 115
Fluoreszenz [mAU]
3000
2000
1000
0
-1000
-2000
1.
2.
3.
1. Kohlrausch-Peak (EOF)
2. Systempeak (vacancy)
3. Systempeak (vacancy)
4. Xanthin-Peak
0 1 2 3 4 5
4.
Migrationszeit [min]
Abb. 52: Charakteristische Elektropherogramme für die indirekte LIF-Detektion von reinem Wasser
und 10 mg/l Xanthin; 10 mM CE-Puffer pH 9,2; 5 µM Fluorescein; 15 kV
Der erste Peak konnte auf einen nach dem Kohlrausch-Gesetz geforderten Leitfähig-
keitsausgleich zwischen Elektrolyt und Probe zurückgeführt werden, durch den die
Probe aufkonzentriert wurde. Dieses Signal wurde wie unter 3.3.2.2 erläutert zur
Bestimmung der Geschwindigkeit des elektroosmotischen Flusses herangezogen.
Nach der Detektion des großen negativen EOF-Signals stieg die Fluoreszenz wieder
sprunghaft an, so daß es zu einem kurzen Überschwingen kam, das sich in dem
direkt nachfolgenden positiven Signal äußerte, bevor sich die Fluoreszenz wieder auf
dem Niveau der Grundlinie stabilisierte. Das zweite negative Signal stellte ebenfalls
einen Systempeak dar, allerdings handelte es sich hierbei um einen Freistellen-Peak.
Da Fluorescein bei einem pH-Wert von 9,2 zweifach negativ geladen vorlag (Huang
und Whang, 1998), wies es eine geringere Mobilität als alle anderen CE-Pufferanionen
auf, so daß es sich bei diesem Signal wie in Abb. 50 dargestellt um die
Formierung einer Pufferion-Zone mit reduzierter Fluorophor-Konzentration handelte,
die somit bei ihrer Detektion zu einem negativen Signal führte. Poppe (1992) bezeichnete
Systempeaks als Eigenzonen und beobachtete, daß man mit einem n
Komponenten enthaltenden elektrophoretischem System n-1 bzw. bei Ausklammerung
eines elektroosmotischen Kohlrausch-Peaks n-2 Freistellen-Peaks erhält.
Da es sich bei dem vorliegenden Elektrolyten mit Borat, Carbonat, Fluorescein
und Natrium als gemeinsames Gegenion, um ein Vier-Komponenten-System
Xanthin
Wasser