Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 132
Netzladung der Glucose, so daß sie langsamer migrierte als das ebenfalls negativ
geladene Fluorescein. Aufgrund dieses Beweglichkeitsunterschiedes bildete sich wie
unter 3.3.2.2 erläutert eine Zone aus, in der die Probe abwesend und mit Ausnahme
des Fluoresceins die weiteren Elektrolytbestandteile in reduzierter Konzentration
vorlagen, so daß ein positiver Systempeak resultierte. Da die Analyse nach 30 s
abgebrochen wurde, konnte das indirekte Signal der langsam migrierenden Glucose
nicht mehr detektiert werden. Die Injektion einer Glucose/ Xanthin-Lösung führte zu
einer Verdrängung des Fluoresceins durch die Nukleobase und damit zur Ausbildung
eines indirekten negativen Peaks (20,82 s). Über das stark frontende Signal drückte
sich wiederum die geringere Leitfähigkeit der Probe gegenüber dem Puffer aus.
Obwohl die Trennung dieser Probe nicht weiter optimiert wurde, zeigte das
Ergebnisse deutlich, daß Xanthin auch neben anderen Komponenten mittels
indirekter Fluoreszenz in mikrofluiden Systemen nachgewiesen werden konnte.
3.4.2 Enzymassay im kontinuierlichem µ-Fließsystem
3.4.2.1. Optimierung der CL-Detektion
Nach der Übertragung des rein elektrophoretischen Xanthin-Nachweises von
einem Makro- auf ein Mikrosystem, wurde für einen enzymatischen Nachweis mit
Xanthin-Oxidase und Chemilumineszenz-Detektion ein Assay in einem miniaturisierten
kontinuierlichen Fließsystem entwickelt.
Alle Untersuchungen zur enzymatischen Xanthin-Bestimmung im kontinuierlichen
Fließsystem wurden mit dem POCRE-1-Chip und der in Tab. 7 beschriebenen
Konfiguration durchgeführt. Die ersten Experimente dienten zur Optimierung der CL-
Reaktion und beruhten daher auf dem Einsatz von POD (2mg/ml), Luminol und H2O2,
jeweils gelöst in 50 mM Borat-Puffer pH 9. In Tab. 26 sind die mit verschiedenen
Luminol-/H2O2-Konzentrationen nach Subtraktion des Grundsignals erhaltenen CL-
Emissionen zusammengefaßt. Trotz der täglichen Konditionierung des Chips zu
Beginn des Meßtages durch Spülen für jeweils 10 min mit 1 M NaOH, H2O dest. und
Puffer vergingen bei der ersten Messung etwa 3 min, bevor ein Signal detektiert
werden konnte. Im weiteren Verlauf eines Meßtages verkürzte sich diese Zeit bis zur
Signalentstehung beispielsweise nach einem vorhergehenden Puffer-Spülschritt auf
15 s. Möglicherweise war eine NaOH-Konditionierung von 10 min nicht ausreichend
lang genug, um sofort einen stabilen EOF zu erzeugen, so daß dieser sich erst mit