Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

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3. Ergebnisse 146 Chip/Betriebsweise POD XOD CL (H2O2) CL (Xanthin) POCRE/kontinuierliches Fließsystem POCRE/kontinuierliches Fließsystem POCRE/kontinuierliches Fließsystem POCRE/kontinuierliches Fließsystem gelöst - ✓ nb immobilisiert - ✓ nb gelöst gelöst nb ✓ gelöst immobilisiert nb ✓ RCC/Enzymreaktor immobilisiert - ✓ nb RCC/Enzymreaktor immobilisiert gelöst ✓ ✗ RCC/Enzymreaktor immobilisiert immobilisiert ✓ ✗ Tab. 29: Zusammenfassung der CL-Messungen in mikrofluiden Systemen; -: nicht eingesetzt; nb: nicht bestimmt; ✓ : CL-Signal detektiert; ✗ : kein CL-Signal detektierbar
4. Zusammenfassung und Diskussion 147 4. Zusammenfassung und Diskussion Das Ziel der vorliegenden Arbeit war die Entwicklung alternativer Methoden zur Bestimmung von Purin-Nukleotiden in der Bioprozeßüberwachung, da bisher eingesetzte Verfahren für eine on-line Überwachung und damit mögliche Kontrolle unge- eignet sind. Da neben elektrophoretischen hierbei auch enzymatische Methoden im Mittelpunkt der Arbeit standen, wurde auf eine Erfassung aller Nukleotide verzichtet. Aufgrund der Tatsache, dass nur wenige enzymatische Detektionsprinzipien zur Nukleotid-Analytik zur Verfügung stehen, wurden Methoden zur Bestimmung von ATP bzw. Xanthin als repräsentative Vertreter dieser Substanzklasse evaluiert. Enzymatische und elektrophoretische Methoden wurden dabei gewählt, da erstere den Aufbau einfacher, automatisierbarer und damit on-line einsetzbarer Systeme gestatten, und letztere das Potential zur Etablierung integrierter miniaturisierter Analysesysteme, sogenannter µTAS, besitzen, die ebenfalls prinzipiell an Prozesse koppelbar sein sollten. Zu prüfen war: • ob sich enzymatische Systeme mit ausreichender Sensitivität und Stabilität zur Bestimmung von ATP und Xanthin in Fermentationsproben entwickeln lassen und ob mit diesen Systemen die Analysendauer im Vergleich zur bisher durchgeführten off-line HPLC-Bestimmung reduziert werden kann. • in welcher Form die Kapillarelektrophorese als Instrument zur Bioprozeßüber- wachung über die Bestimmung von Xanthin eingesetzt werden kann. • ob eine Übertragung der elektrophoretischen Trennung bzw. des enzymatischen Xanthin-Assays auf ein mikrofluides System möglich ist und welche Modifikationen in Hinblick auf die Detektion und Konzentrationen der beteiligten Reagenzien eine Übertragung vom Makro- auf ein Mikrosystem erfordert. 4.1 ATP-Sensoren 4.1.1 Charakterisierung der GOD/HK-Elektroden Die Charakterisierung der auf Basis von Platin-Dickschichtelektroden produzierten Bi-Enzymsensoren wurde im Durchfluß in einem Fließinjektions-Analysesystem vorgenommen. Die Co-Immobilisierung erfolgte über eine Quervernetzung mittels Glutardialdehyd auf der zuvor silanisierten Elektrodenoberfläche.
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Vorveröffentlichungen der Disserta
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Wer A sagt, muß nicht B sagen. er
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Herrn Dr. Dirk Kuhlmeier danke ich
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