Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 113
In Abb. 50 ist die prinzipielle Entstehung eines Systempeaks erklärt, wenn sich die
Mobilitäten der beteiligten Ionen in der Reihenfolge µB2< µB1< µP (B1/B2: Pufferionen;
P: Probe) verhalten. Nach der Injektion der Probe (Abb. 50a) und Anlegen eines
elektrischen Feldes verändert sich das Muster der Zonen. Aufgrund der größeren
Mobilität übernimmt die Probe bei der Ausbildung eines isotachophoretischen
Systems die Rolle des Leitelektrolyten. Hinter dem Analyten bildet sich eine Zone
aus, in der das Pufferion B1 aufgrund seiner größeren Beweglichkeit im Vergleich zu
B2 praktisch separat vorliegt. Die Schnittstelle der B1/Proben-Zone stellt dabei eine
isotachophoretische Grenze dar, die von B1 nicht überschritten werden kann (Abb.
50b). Die Entstehung einer reinen B1-Bande geht mit der Tatsache einher, daß hier
das zweite Pufferion B2 fehlt und es sich bei dieser Zone somit auch um eine B2-
Fehlstelle (vacancy) handelt. Gleichzeitig kommt es zu einer Verbreiterung der
Probenbande durch Elektrodispersion, da die Probe schneller als beide Pufferionen
migriert. Zum großen Teil dringt jedoch B2 aufgrund der geringsten Beweglichkeit
unter den beteiligten Ionen in die Probenzone ein. In Abbildung 50c ist die Situation,
wie sie nach weiterer Elektromigration vorliegt, dargestellt. B2 durchwandert das gesamte
System, während die Probenzone durch das Eindringen von B1 nochmals ver-
breitert wird. Hieraus resultiert die Entstehung von zwei getrennt voneinander
wandernden Banden: einer Probenzone, in der die Konzentrationen der Pufferionen
aufgrund des Austauschprozesses durch den Analyten modifiziert sind, wobei die
Probe bevorzugt B1 verdrängt, dessen Mobilität der des Analyten am ähnlichsten ist.
Die zweite Zone wird vom B1-Ion selbst gebildet. In dieser Bande liegt keine Probe
und B2 nur in reduzierter Konzentration vor. Durch diese Zone wird ein Systempeak
produziert, der auch als B2-Freistelle bezeichnet werden kann. Handelt es sich bei B1
um das Fluorphor entsteht ein positiver Systempeak, besitzt dagegen ein nicht
fluoreszierendes Pufferion eine höhere Mobilität, bildet sich durch das Fehlen des
Fluorophors in dieser Zone ein Systempeak in negativer Richtung aus.
In den Abbildungen 51a-c sind die analogen Situationen gezeigt, für den Fall, daß die
Mobilitäten in umgekehrter Reihenfolge (µP< µB2< µB1) vorliegen. Die Probe stellt hier
aufgrund der geringsten Mobilität den Folgeelektrolyten in dem transienten isotachophoretischen
System dar, das sich vor dieser Zone ausbildet. Durch die verringerte
Beweglichkeit im Vergleich zu B1 akkumuliert B2 vor der Probenzone, die isotachophoretische
Proben/B2-Grenze kann B2 dabei jedoch nicht durchdringen (Abb. 51b).
Bei fortschreitender Elektromigration wird die Probenbande aufgrund der größeren