Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 65
Glutardialdehyd auf APTS-silanisiertes CPG co-immobilisiert. Über die dadurch zur
Verfügung stehende größere Oberfläche sollte sich im allgemeinen mehr Enzym
binden und damit ein im Vergleich höherer absoluter enzymatischer Umsatz erzielen
lassen. Die aktivierten Glas-Beads wurden mit einem Gesamtvolumen von 3 ml
Enzymlösung, in der Hexokinase und Glucose-Oxidase im Aktivitätsverhältnis von
2:1 vorlagen, immobilisiert. Das Immobilisat wurde im Anschluß mit Hilfe einer
peristaltischen Pumpe in eine Kartusche (ID: 6 mm ; 0,14 ml Volumen ≈ 56 mg CPG)
gefüllt und über einen Reaktorhalter in das Fließsystem integriert; die H2O2-Detektion
fand an einer silanisierten Platin-Dickschichtelektrode statt. Zunächst wurde auch
hier die Abhängigkeit des ATP-Signals von der Glucosevorlage im Carrier untersucht
(Abb. 23).
Stromabnahme [nA]
140
120
100
80
60
40
20
0
10 µM Glucose
50 µM Glucose
0,5 mM Glucose
1 mM Glucose
0 200 400 600 800 1000
ATP-Konzentration [µM]
Abb. 23: Einfluß der Glucose-Carrier-Konzentration auf das ATP-Signal bei Verwendung eines
HK/GOD-Reaktors
Auch unter Verwendung eines Bi-Enzymreaktors zeigte das amperometrische Signal
die bereits bei den Enzymelektroden beobachtete Abhängigkeit von der Glucose-
Konzentration. Ein Vergleich mit den Tabelle 13 angegebenen Eigenschaften der
Enzymelektroden macht deutlich, daß sich der Reaktor bei den beiden geringsten
Glucose-Konzentrationen sehr ähnlich wie die Elektrode verhielt, erhöhte man die
Kohlenhydratmenge jedoch, wurden für den Reaktor kleinere lineare Meßbereiche
sowie geringere ATP-Sensitivitäten bestimmt, woraus die Berechnung höherer
Nachweisgrenzen resultierte.