Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 121
setzten Xanthin-Standards (10 mg/l) dar. Wie auch mit dem CE-Puffer als
Trennmedium wurde eine generelle Vergrößerung aller Signale durch die veränderte
Probenzusammensetzung herbeigeführt. Durch den Zusatz des Xanthins änderte
sich das Leitfähigkeitsverhältnis zwischen Probe und Elektrolyt entscheidend. Aufgrund
der nun größeren Leitfähigkeit der Probe wurde diese an der isotachophoretischen
Grenze nicht aufkonzentriert, sondern verdünnt, so daß in diesem Fall
ein positiver Kohlrausch-EOF-Peak entstand. Der negative Xanthin-Peak wies eine
Höhe von 8360 mAU auf und war somit um 71% größer gegenüber dem mit
optimierter Puffer- und Fluorescein-Konzentration aufgezeichnetem Signal trotz der
mit 2 µM um den Faktor 25 reduzierten Fluorescein-Konzentration. Jedoch verbreiterte
sich der indirekte Xanthin-Peak gleichzeitig auch von 6,6 s auf 28,8 s auf
halber Peakhöhe. Aufgrund der höheren Leitfähigkeit der Probe und der somit im
Vergleich zum Elektrolyten verminderten Feldstärke, wanderten die Xanthin-Moleküle
im Konzentrationsmaximum langsamer als an den Flanken dieser Zone, was zu
einem langsamen Anstieg und schnellem Abstieg (frontender Peak) des Signals
führte.
Durch den Einsatz der in Wasser angesetzten Fluorescein-Lösung und der damit
verbundenen Herabsetzung der Ionenstärke wurde die Sensitivität des Xanthin-
Nachweises erhöht. Desbène et al. (1995) beobachteten, daß die Empfindlichkeit der
indirekten LIF-Detektion im allgemeinen durch geringe Elektrolyt-Ionenstärken
verbessert wird, daß diese jedoch auf der anderen Seite die Qualität der Trennung
einschränken. Daher ist es nötig die Bedingungen so zu wählen, daß diese einen
Kompromiß zwischen Empfindlichkeit und Trennleistung darstellen.
Die in diesem Kapitel beschriebenen Untersuchungen dienten nicht zur Optimierung
der indirekten Xanthin-Detektion, sondern sollten lediglich zeigen, daß für diesen
Analyten auch ohne Derivatisierung ein Fluoreszenz-Nachweis möglich war, um die
wichtigste Voraussetzung für eine Übertragung der Trennung auf einen Mikrochip zu
gewährleisten. Da sich eine UV-Absorptionsdetektion, wie in Kap. 1.6.2.2 geschildert,
noch nicht mit analytischen Mikrosystemen kombinieren läßt, wurden mit dem
kommerziellen CE-Gerät grundlegende Experimente zum Nachweis von Xanthin
über indirekte LIF-Detektion mit dem Ziel durchgeführt, diesen Assay anschließend
auf ein mikrofluides Kanalnetzwerk übertragen zu können, ohne daß an dieses
weitere instrumentelle Anforderungen gestellt werden mußten.