Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 108
Absorption [mAU]
400
300
200
100
0
-100
-200
-300
0,5 mg/l Xanthin
1 mg/l Xanthin
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 5,5
Migrationszeit [min]
Abb. 49: Xanthin-Trennung in verdünntem Medium (1:5); 10 mM CE-Puffer pH 9,2; 15 kV
Die Verdünnung des simulierten Mediums führte zu einer deutlichen Verbesserung
der Trennqualität (Abb. 49). Unter diesen Bedingungen wurde für 1 mg/l Xanthin
(schwarz) mit einer Höhe von 307 mAU ein Peak erhalten, der gegenüber dem in un-
verdünntem Medium detektierten 2 mg/l Xanthin-Signal um den Faktor 5,7 vergrößert
war. Auch eine Analyt-Konzentration von 0,5 mg/l (rotes Elektropherogramm) war mit
einer Peakhöhe von 86 mAU noch meßbar. Die Migrationszeit blieb bei dieser Untersuchungsreihe
mit 103/104 s im Bereich der in unverdünntem Medium durchge-
führten CE-Trennungen. Der scheinbare Widerspruch, zwischen dem in Gleichung
12 formulierten Zusammenhang, daß das Zeta-Potential mit einer Erhöhung der
Elektrolyt-Ionenstärke abnimmt, der EOF sich damit verringert und der Beobachtung,
daß sich die Xanthin-Migration bei einer Verdünnung des Mediums um einige
Sekunden verlangsamte, war auf die Verwendung einer neuen möglicherweise noch
nicht ausreichend konditionierten Kapillare zurückzuführen.
Zusammenfassend erwies sich die Kapillarelektrophorese mit on-column UV-
Absorptionsdetektion prinzipiell zur Xanthin-Bestimmung in Fermentationsproben
geeignet. Um eine Detektion im relevanten Konzentrationsbereich (1 bis 50 mg/l) zu
gewährleisten, war jedoch eine 1:5 Verdünnung des Mediums vor der Injektion
notwendig. Da für die CE-Analytik keine Fermentationsproben zur Verfügung
standen, war es nicht möglich neben dem mit Xanthin dotiertem Medium die von den