Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

2. Material und Methoden 37
2.2.5 Fließinjektions-Analyse
Die von Ruzicka und Hansen 1975 vorgestellte Fließinjektions-Analyse (FIA)
basiert auf der Injektion eines definierten Probenvolumens in einen kontinuierlichen,
unsegmentierten Trägerstrom. Die Probenzone erfährt während des Transportes
durch das Fließsystem eine chemische oder physikalische Veränderung, die durch
einen geeigneten Detektor registriert wird. Als automatisiertes System hat sich die
FIA-Technologie in vielen analytischen Bereichen etabliert, da alle Detektionsprinzipien
integriert werden können, für die geeignete Durchflußmeßgeräte zur Verfügung
stehen. Des weiteren können diese Systeme aufgrund ihrer Flexibilität einfach
an individuelle Fragestellungen adaptiert werden.
In der Fließinjektions-Analyse kommt es im Vergleich zu chromatographischen
Analysetechniken nicht zu einer Retention der Probenkomponenten in einer
Trennsäule, sondern zu einer Umsetzung der injizierten Probe mit Reagenzien im
Trägerstrom. Als charakteristische Kenngröße dient der Dispersion-Koeffizient DDis,
über den die Verteilung (Dispersion) der Probe im Trägerstrom angegeben wird. Die
Dispersion ist von der Fließgeschwindigkeit, Schlauchlänge, -durchmesser, -führung
(gerade oder gewunden) und vom Probenvolumen abhängig und läßt sich mathe-
matisch beschreiben als:
c
D = (7)
0
Dis
c T
C0 entspricht dabei der Konzentration der injizierten Probe und cT der Trägerstrom-
Analyt-Konzentration am Detektor. Die Konstanz der Dispersion ist die Voraus-
setzung für die Reproduzierbarkeit der Messungen in einem FIA-System. Durch die
exakte zeitliche Kontrolle aller Vorgänge (Reaktionen) im diesem System, muß die
Einstellung des thermodynamischen Gleichgewichtszustandes nicht abgewartet
werden, so daß eine höhere Probenfrequenz erreicht wird.
2.2.5.1 Enzymatische Detektion in der FIA
Durch den Einsatz von biochemischen Komponenten wie Antikörpern oder
Enzymen läßt sich die Selektivität und Sensitivität des analytischen Systems
erhöhen. Bei diesen Reaktionen kann im Idealfall auf die Zugabe weiterer
Reagenzien verzichtet werden. Durch die Immobilisierung des biochemischen