Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

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3. Ergebnisse 140 A B Abb. 67: Elektrokinetische Reaktorbeladung (Oleschuk et al., 2000) Zur vollständigen luftblasenfreien Beladung der Kammer wurden durchschnittlich etwa 10 min benötigt. Eine Erhöhung des Potentials über die angelegten +800 V hinaus führte zu einer Aggregation des Trägermaterials und damit zu einem Abbruch des Transportprozesses. 3.4.3.2. Optimierung der Chemilumineszenz-Reaktion Zunächst wurde auch mit diesem Layout die Chemilumineszenz-Reaktion optimiert, indem ausschließlich POD-Beads (2 mg/ml) in die Kavität gepackt und Luminol, H2O2 und Borat-Puffer entsprechend den Angaben aus Tabelle 8 in die drei Reservoire pipettiert wurden. Das gewählte und ebenfalls in dieser Tabelle
3. Ergebnisse 141 angebende Spannungsprogramm führte zu einer Vermischung von Luminol und Wasserstoffperoxid über dem POD-Bead-Bett. Aufgrund der aus den Chemilumineszenz-Messungen im POCRE-Chip resultierenden Ergebnisse wurde der Detektor jedoch nicht direkt über der Kavität positioniert, sondern etwas weiter flußabwärts, um so eine vollständigere Diffusion zu erreichen. Das Mikroskop-Objektiv wurde daher so über Kanal 1 justiert, daß der den Reaktor begrenzende Steg gerade noch im Sichtfeld lag. Die ersten Untersuchungen wurden zunächst mit den in Tabelle 27 angegebenen Luminol- und H2O2-Konzentrationen durchgeführt. Auch bei diesem Chip-Design dauerte es zu Beginn eines Meßtages etwa 3 min bis sich ein stabiler elektroosmotischer Fluß ausgebildet hatte und das erste CL-Signal detektiert werden konnte. Zwischen den einzelnen Läufen reduzierte sich diese Wartezeit auf 10 s. Messung Luminol-Konz. H2O2-Konz. CL-Signal [mAU] A 0,5 mM 50 µM 445 B 0,5 mM 100 µM 1372 C 1 mM 100 µM 2522 D 10 mM 1 mM 4045 Tab. 27: Einfluß der Luminol- und H2O2-Konzentration auf das CL-Signal bei Einsatz eines PODmikro-Reaktors Die ebenfalls in Tabelle 27 angegebenen CL-Emissionen machten deutlich, daß auch hier mit einer Kombination von 10 mM Luminol/1 mM H2O2 die höchsten Intensitäten erzielt wurden. Im Gegensatz zu den POCRE-Chip-Untersuchungen führten aufgrund der größeren zur Verfügung stehenden Katalysatormenge auch geringere Konzentrationen bereits zu deutlichen CL-Signalen. Die in Tabelle 27 zusammengefaßten Emissionen entsprachen den Ausgangssignalen, die jeweils bei den ersten Messungen mit den entsprechenden Luminol/H2O2-Kombinationen detektiert wurden. Ein Vergleich von drei bzw. vier in Abbildung 68 dargestellten aufeinanderfolgenden Messungen zeigte jedoch, daß die Signalstabilität erheblich von den Reagenzien-Konzentrationen beeinflußt wurde. Mit einer 10 mM Luminol/1 mM H2O2-Kombination wurde innerhalb von vier Messungen eine Signalabnahme auf 61% sowie eine Braunfärbung der gepackten POD-Beads beobachtet. Diese Ver-
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