Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 59
Die Elektroden 1 bis 5 wurden anschließend als Detektoren in das Fließsystem
integriert. Zur Erzeugung des Grundsignals durch die GOD-Reaktion wurde dem
Carrier neben Magnesiumchlorid noch 50 µM Glucose zugesetzt. Um eine Signaländerung
zu vermeiden, die lediglich aus einer Verdünnung der Glucose- oder Mg 2+ -
Konzentration im Trägerstrom durch die Injektion einer in reinem Puffer angesetzten
Probe resultierte, wurden alle ATP-Standards ebenfalls in Clark & Lubs unter Zusatz
dieser beiden Substanzen gelöst. Die Messungen wurden vorgenommen, indem vor
jeder ATP-Probe zur Bestimmung der Grundlinie jeweils der Carrier injiziert wurde. In
Abbildung 19a sind die auf die Anwesenheit von ATP zurückzuführenden Signalabnahmen
dargestellt, Abbildung 19b zeigt zur besseren Übersicht nochmals die mit
den verschiedenen Elektroden erhaltenen Signalverläufe in einem ATP-Konzentrationsbereich
von 0 bis 62,5 µM.
Stromabnahme [nA]
14
12
10
8
6
4
2
0
Elektrode 1
Elektrode 2
Elektrode 3
Elektrode 4
Elektrode 5
siehe Abb. 19b
0 200 400 600 800 1000
ATP-Konzentration [µM]
Abb. 19a: Einfluß des HK/GOD-Aktivitätsverhältnisses auf das amperometrische ATP-Signal
Bei einer konstanten Glucose-Konzentration von 50 µM wurden die größten Stromabnahmen
bei Injektion einer ATP-haltigen Probe mit einem HK/GOD-Aktivitätsverhältnis
von 1,78 (Elektrode 4) erreicht. Wurde das Verhältnis weiter zu Ungunsten
der GOD verschoben, verkleinerte sich die Differenz zwischen dem Grund- und ATP-
Signal mit abnehmender immobilisierter GOD-Aktivität. Zurückzuführen war dieser
Effekt auf eine Substratsättigung der GOD. Die im Carrier vorliegende Glucose-
Konzentration blieb auch in Gegenwart von ATP ausreichend groß, um eine geringe