Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

Weitere Magazine

Empfehlungen

Info

3. Ergebnisse 120 Elektropherogramm für die Analyse von reinem Wasser ist dabei als rote Linie dargestellt. Fluorezsenz [mAU] 30000 25000 20000 15000 10000 5000 0 10 mg/l Xanthin Wasser Xanthin 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 Migrationszeit [min] Abb. 55: Trennung von Xanthin unter Verwendung von 2 µM Fluorescein als Elektrolyt, 4 s Druckinjektion von 10 mg/l Xanthin, 20 kV Deutlich zu erkennen war, daß aufgrund der nicht bzw. nur sehr unzureichend puffernden Wirkung des Elektrolyten der pH-Wert-Unterschied zur Probe nicht kompensiert werden konnte und sich daraus eine stufenartige Verschiebung der Fluores- zenz-Grundlinie ergab. Aufgrund des durch Fluorescein verursachten geringen Leitfähigkeitsunterschiedes entstand ein vergleichsweise kleiner negativer Kohlrausch- EOF-Peak. Obwohl mit Fluorescein und seinem Gegenion Natrium eigentlich nur ein zwei-Ionen-System vorlag und somit nach der Theorie von Poppe keine vacancy Peaks auftreten sollten (siehe S. 115), wurde im Elektropherogramm der Wasser- Analyse ein solcher Systempeak beobachtet. Bei Einsatz von Elektrolyten mit nur einem Anion und Kation kann die Rolle des zur Ausbildung eines Systempeaks nötigen dritten Ions bei niedrigen oder hohen pH-Werten von H + - bzw. OH - -Ionen übernommen werden (Gross und Yeung, 1989; Beckers, 1994). Aufgrund der größeren Mobilität des einfach negativ geladenen OH - im Vergleich zum Fluorescein, das bei diesem pH-Wert zwei Ladungen trug, handelte es sich bei dem zweiten auftretenden negativen Signal um einen Systempeak, der aus einer reduzierten Fluorescein-Konzentration innerhalb einer OH - -Bande resultierte. Das zweite in Abb. 55 gezeigte Elektropherogramm (schwarz) stellt die Injektion eines in Wasser ange-
3. Ergebnisse 121 setzten Xanthin-Standards (10 mg/l) dar. Wie auch mit dem CE-Puffer als Trennmedium wurde eine generelle Vergrößerung aller Signale durch die veränderte Probenzusammensetzung herbeigeführt. Durch den Zusatz des Xanthins änderte sich das Leitfähigkeitsverhältnis zwischen Probe und Elektrolyt entscheidend. Aufgrund der nun größeren Leitfähigkeit der Probe wurde diese an der isotachophoretischen Grenze nicht aufkonzentriert, sondern verdünnt, so daß in diesem Fall ein positiver Kohlrausch-EOF-Peak entstand. Der negative Xanthin-Peak wies eine Höhe von 8360 mAU auf und war somit um 71% größer gegenüber dem mit optimierter Puffer- und Fluorescein-Konzentration aufgezeichnetem Signal trotz der mit 2 µM um den Faktor 25 reduzierten Fluorescein-Konzentration. Jedoch verbreiterte sich der indirekte Xanthin-Peak gleichzeitig auch von 6,6 s auf 28,8 s auf halber Peakhöhe. Aufgrund der höheren Leitfähigkeit der Probe und der somit im Vergleich zum Elektrolyten verminderten Feldstärke, wanderten die Xanthin-Moleküle im Konzentrationsmaximum langsamer als an den Flanken dieser Zone, was zu einem langsamen Anstieg und schnellem Abstieg (frontender Peak) des Signals führte. Durch den Einsatz der in Wasser angesetzten Fluorescein-Lösung und der damit verbundenen Herabsetzung der Ionenstärke wurde die Sensitivität des Xanthin- Nachweises erhöht. Desbène et al. (1995) beobachteten, daß die Empfindlichkeit der indirekten LIF-Detektion im allgemeinen durch geringe Elektrolyt-Ionenstärken verbessert wird, daß diese jedoch auf der anderen Seite die Qualität der Trennung einschränken. Daher ist es nötig die Bedingungen so zu wählen, daß diese einen Kompromiß zwischen Empfindlichkeit und Trennleistung darstellen. Die in diesem Kapitel beschriebenen Untersuchungen dienten nicht zur Optimierung der indirekten Xanthin-Detektion, sondern sollten lediglich zeigen, daß für diesen Analyten auch ohne Derivatisierung ein Fluoreszenz-Nachweis möglich war, um die wichtigste Voraussetzung für eine Übertragung der Trennung auf einen Mikrochip zu gewährleisten. Da sich eine UV-Absorptionsdetektion, wie in Kap. 1.6.2.2 geschildert, noch nicht mit analytischen Mikrosystemen kombinieren läßt, wurden mit dem kommerziellen CE-Gerät grundlegende Experimente zum Nachweis von Xanthin über indirekte LIF-Detektion mit dem Ziel durchgeführt, diesen Assay anschließend auf ein mikrofluides Kanalnetzwerk übertragen zu können, ohne daß an dieses weitere instrumentelle Anforderungen gestellt werden mußten.
Seite 1 und 2:
Entwicklung alternativer Methoden z
Seite 3 und 4:
Vorveröffentlichungen der Disserta
Seite 5 und 6:
Wer A sagt, muß nicht B sagen. er
Seite 7 und 8:
Herrn Dr. Dirk Kuhlmeier danke ich
Seite 9 und 10:
Inhaltsverzeichnis II 2.1.5.3 Kapil
Seite 11 und 12:
Inhaltsverzeichnis IV 3.3.2 Indirek
Seite 13 und 14:
Abkürzungen VI Abkürzungsindex AD
Seite 15 und 16:
1. Einleitung 1 1. Einleitung 1.1 Z
Seite 17 und 18:
1. Einleitung 3 Störung des System
Seite 19 und 20:
1. Einleitung 5 1.3.3 Weitere intra
Seite 21 und 22:
1. Einleitung 7 1.4 Physiologische
Seite 23 und 24:
1. Einleitung 9 Als Zwischenprodukt
Seite 25 und 26:
1. Einleitung 11 Licht in einem Wel
Seite 27 und 28:
1. Einleitung 13 Untersuchungen dur
Seite 29 und 30:
1. Einleitung 15 gradienten erreich
Seite 31 und 32:
1. Einleitung 17 ATP als Adeninnukl
Seite 33 und 34:
1. Einleitung 19 das Kanalnetzwerk
Seite 35 und 36:
1. Einleitung 21 über optische Fas
Seite 37 und 38:
2. Material und Methoden 23 2.1.2 E
Seite 39 und 40:
2. Material und Methoden 25 Optisch
Seite 41 und 42:
2. Material und Methoden 27 Tempera
Seite 43 und 44:
2. Material und Methoden 29 Carbon-
Seite 45 und 46:
2. Material und Methoden 31 1,5 µl
Seite 47 und 48:
2. Material und Methoden 33 2.2.3.3
Seite 49 und 50:
2. Material und Methoden 35 2.2.4 E
Seite 51 und 52:
2. Material und Methoden 37 2.2.5 F
Seite 53 und 54:
2. Material und Methoden 39 Die amp
Seite 55 und 56:
2. Material und Methoden 41 zur Unt
Seite 57 und 58:
2. Material und Methoden 43 die in
Seite 59 und 60:
2. Material und Methoden 45 Der EOF
Seite 61 und 62:
2. Material und Methoden 47 Möglic
Seite 63 und 64:
2. Material und Methoden 49 seitenw
Seite 65 und 66:
2. Material und Methoden 51 kleinst
Seite 67 und 68:
2. Material und Methoden 53 2.2.10.
Seite 69 und 70:
2. Material und Methoden 55 ledigli
Seite 71 und 72:
3. Ergebnisse 57 salz-Konzentration
Seite 73 und 74:
3. Ergebnisse 59 Die Elektroden 1 b
Seite 75 und 76:
3. Ergebnisse 61 Im allgemeinen ver
Seite 77 und 78:
3. Ergebnisse 63 Strom [nA] 180 160
Seite 79 und 80:
3. Ergebnisse 65 Glutardialdehyd au
Seite 81 und 82:
3. Ergebnisse 67 Vorgänge trotz de
Seite 83 und 84: 3. Ergebnisse 69 Strom [µA] 150 12
Seite 85 und 86: 3. Ergebnisse 71 Strom [µA] 14 0,1
Seite 87 und 88: 3. Ergebnisse 73 Elektronentransfer
Seite 89 und 90: 3. Ergebnisse 75 zu 38% ab (Abb. 28
Seite 91 und 92: 3. Ergebnisse 77 1993), führte zu
Seite 93 und 94: 3. Ergebnisse 79 Potential [mV] H2O
Seite 95 und 96: 3. Ergebnisse 81 herabgesetzt wurde
Seite 97 und 98: 3. Ergebnisse 83 3.2.3.1 Untersuchu
Seite 99 und 100: 3. Ergebnisse 85 Xanthin- Konz. XOD
Seite 101 und 102: 3. Ergebnisse 87 höheren detektier
Seite 103 und 104: 3. Ergebnisse 89 Carriers mit diese
Seite 105 und 106: 3. Ergebnisse 91 Strom [nA] 1750 15
Seite 107 und 108: 3. Ergebnisse 93 durch die komplexe
Seite 109 und 110: 3. Ergebnisse 95 3.2.3.8. Probenahm
Seite 111 und 112: 3. Ergebnisse 97 Strom [nA] 800 700
Seite 113 und 114: 3. Ergebnisse 99 Konzentration beob
Seite 115 und 116: 3. Ergebnisse 101 Substanzen, die i
Seite 117 und 118: 3. Ergebnisse 103 Vergleich zur nom
Seite 119 und 120: 3. Ergebnisse 105 Die effektive Mob
Seite 121 und 122: 3. Ergebnisse 107 Wie deutlich zu e
Seite 123 und 124: 3. Ergebnisse 109 E. coli-Zellen au
Seite 125 und 126: 3. Ergebnisse 111 1. Die Gegenwart
Seite 127 und 128: 3. Ergebnisse 113 In Abb. 50 ist di
Seite 129 und 130: 3. Ergebnisse 115 Fluoreszenz [mAU]
Seite 133: 3. Ergebnisse 119 so daß durch ein
Seite 137 und 138: 3. Ergebnisse 123 Optik zu realisie
Seite 139 und 140: 3. Ergebnisse 125 hier mit der Fluo
Seite 145 und 146: 3. Ergebnisse 131 ponenten in unter
Seite 147 und 148: 3. Ergebnisse 133 Durchführung der
Seite 149 und 150: 3. Ergebnisse 135 Tabelle 7 angegeb
Seite 151 und 152: 3. Ergebnisse 137 Format mit immobi
Seite 153 und 154: 3. Ergebnisse 139 3.4.3. Mikro-Flie
Seite 155 und 156: 3. Ergebnisse 141 angebende Spannun
Seite 157 und 158: 3. Ergebnisse 143 3.4.3.3 Optimieru
Seite 159 und 160: 3. Ergebnisse 145 Emissionen. Eine
Seite 161 und 162: 4. Zusammenfassung und Diskussion 1
Seite 179 und 180: 5. Literatur 165 5. Literatur Atkin
Seite 181 und 182: 5. Literatur 167 Colowick, S.P. (19
Seite 183 und 184: 5. Literatur 169 Hoffman, N.E.; Lia
Seite 185 und 186:
5. Literatur 171 Liu, Z.; Li, T.; W
Seite 187 und 188:
5. Literatur 173 Rehák, M.; ânejd
Seite 189:
5. Literatur 175 Wei, H.; Wang, T.;
Alle anzeigen

Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

Erfolgreiche ePaper selbst erstellen

Template löschen?

Als Template speichern?