Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

2. Material und Methoden 51
kleinsten Wanderungsgeschwindigkeit den Schnittpunkt erreicht hatte, wurde
gewährleistet, daß die Zusammensetzung der Probe in diesem Bereich der der
Orginalprobe entsprach. Durch einen Wechsel der angelegten Spannung von den
Seitenkanälen zum Hauptkanal (Reservoir 2 und 5) wurde das sich zwischen den
beiden Schnittpunkten befindende Probensegment in Richtung Reservoir 5
transportiert und es kam zur elektrophoretischen Separation der Probenbestandteile.
2.2.10.4 Detektion
Zu der am häufigsten on-Chip eingesetzten Detektionsmethode zählt die Laser-
induzierte Fluoreszenz (LIF). Der Laserstrahl wurde, wie in Abbildung 16 schematisch
dargestellt, zunächst über eine Linse fokussiert und anschließend über einen Spiegel
als etwa 40 µm großer Spot auf den Trennkanal gelenkt. Die an diesem Punkt von
der Probe emittierte Fluoreszenz wurde über ein Mikroskop-Objektiv gesammelt,
durch eine Lochblende (800 µm) und optischen Bandpaßfilter (530 nm) auf einen
Photomultiplier (PMT) gerichtet. Die Datenaufnahme erfolgte mit einer Frequenz von
50 Hz.
Ar + -Laser
Mikrochip
PMT
Abb. 16: Schematischer Aufbau zur LIF-Detektion auf einem Mikrochip
Linse
Lochblende
Emissionsfilter
Spiegel