Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 68
Glucose durch die separate Immobilisierung der beiden Enzyme auf räumlich
voneinander getrennte Träger eine erhebliche Sensitivitätssteigerung gegenüber der
Bi-Enzymelektrode (6,7 nA/mM) erreicht. Die Glucose wurde zunächst im Reaktor
allein durch die Hexokinase umgesetzt, durch die Abwesenheit der GOD und damit
einem Ausbleiben der Konkurrenz beider Enzyme um das Substrat, konnte mehr
Glucose auf diesem Weg zu Glucose-6-Phosphat phosphoryliert werden, worauf sich
letztendlich die größere Empfindlichkeit gegenüber den co-immobilisierten Biosensoren
begründete. Problematisch blieb jedoch weiterhin die geringe Stabilität der
immobilisierten Hexokinase, die auch in diesem Fall nach einer Lagerung über Nacht
bei 4°C so stark deaktiviert wurde, daß am darauffolgenden Tag keine ATP-Signale
mehr detektiert werden konnten.
3.2. Amperometrische Bestimmung von Xanthin
3.2.1 XOD-Platin-Dickschichtelektroden
3.2.1.1 Untersuchung unspezifischer Signale
Da es sich bei Xanthin um eine Substanz handelte, die eine eigene
elektrochemische Aktivität besaß und damit an der Elektrode direkt oxidiert werden
konnte, wurde zunächst mit Hilfe der cyclischen Voltametrie (Kap. 2.2.4.2) der
Einfluß des Potentials auf dieses enzym-unabhängige Signal untersucht. Als
Arbeitselektrode diente eine unbehandelte Platin-Dickschichtelektrode, an die kein
festes Potential angelegt wurde, sondern bei der das Potential im Bereich von –1 V
bis +1 V mit konstanter Geschwindigkeit (50 mV/s) variiert wurde. Es wurden
Voltamogramme für Clark & Lubs-Puffer pH 8 (Abb. 25, schwarz), 0,1 mM (rot) und 1
mM Xanthin (blau) aufgezeichnet.
Wie in Abb. 25 zu erkennen, zeigten die Xanthin-Voltamogramme die Ausbildung
einer bei +400 mV beginnenden Stromwelle, die ihren Maximalwert bei etwa +700
mV erreichte. In reinem Clark & Lubs-Puffer wurde dieser Elektrodenprozeß nicht
beobachtet, so daß der Stromanstieg allein auf die Oxidation von Xanthin zurückzuführen
war.