Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

3. Ergebnisse 141
angebende Spannungsprogramm führte zu einer Vermischung von Luminol und
Wasserstoffperoxid über dem POD-Bead-Bett. Aufgrund der aus den Chemilumineszenz-Messungen
im POCRE-Chip resultierenden Ergebnisse wurde der Detektor
jedoch nicht direkt über der Kavität positioniert, sondern etwas weiter flußabwärts,
um so eine vollständigere Diffusion zu erreichen. Das Mikroskop-Objektiv wurde
daher so über Kanal 1 justiert, daß der den Reaktor begrenzende Steg gerade noch
im Sichtfeld lag.
Die ersten Untersuchungen wurden zunächst mit den in Tabelle 27 angegebenen
Luminol- und H2O2-Konzentrationen durchgeführt. Auch bei diesem Chip-Design
dauerte es zu Beginn eines Meßtages etwa 3 min bis sich ein stabiler elektroosmotischer
Fluß ausgebildet hatte und das erste CL-Signal detektiert werden
konnte. Zwischen den einzelnen Läufen reduzierte sich diese Wartezeit auf 10 s.
Messung Luminol-Konz. H2O2-Konz. CL-Signal [mAU]
A 0,5 mM 50 µM 445
B 0,5 mM 100 µM 1372
C 1 mM 100 µM 2522
D 10 mM 1 mM 4045
Tab. 27: Einfluß der Luminol- und H2O2-Konzentration auf das CL-Signal bei Einsatz eines PODmikro-Reaktors
Die ebenfalls in Tabelle 27 angegebenen CL-Emissionen machten deutlich, daß
auch hier mit einer Kombination von 10 mM Luminol/1 mM H2O2 die höchsten
Intensitäten erzielt wurden. Im Gegensatz zu den POCRE-Chip-Untersuchungen
führten aufgrund der größeren zur Verfügung stehenden Katalysatormenge auch geringere
Konzentrationen bereits zu deutlichen CL-Signalen. Die in Tabelle 27 zusammengefaßten
Emissionen entsprachen den Ausgangssignalen, die jeweils bei
den ersten Messungen mit den entsprechenden Luminol/H2O2-Kombinationen
detektiert wurden. Ein Vergleich von drei bzw. vier in Abbildung 68 dargestellten aufeinanderfolgenden
Messungen zeigte jedoch, daß die Signalstabilität erheblich von
den Reagenzien-Konzentrationen beeinflußt wurde. Mit einer 10 mM Luminol/1 mM
H2O2-Kombination wurde innerhalb von vier Messungen eine Signalabnahme auf
61% sowie eine Braunfärbung der gepackten POD-Beads beobachtet. Diese Ver-