Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

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2. Material und Methoden 22 2. Material und Methoden 2.1 Material 2.1.1 Chemikalien Adenosin-5´-triphosphat Sigma, Deisenhofen 3-Aminopropyltriethoxysilan (APTS) Aldrich, Steinheim Borsäure Riedel-de Haën, Seelze Citronensäure-1-hydrat Riedel-de Haën, Seelze Di-Kaliumhydrogenphosphat Merck, Darmstadt DEAE Dextran Sigma, Deisenhofen Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) Merck, Darmstadt Ethyl-3-(3-Dimethylaminopropyl)-carbodiimid (EDC) Sigma, Deisenhofen Fluorescein (di-Natrium-Salz) Sigma, Deisenhofen β-D-Glucose Merck, Darmstadt Glutardialdehyd (25%) Merck, Darmstadt 3-Glycidoxypropylmethoxysilan (GOPS) ABCR, Karlsruhe Kaliumchlorid Riedel-de Haën, Seelze Kaliumhexacyanoferrat (III) Merck, Darmstadt Kaliumdihydrogenphoshat Merck, Darmstadt Lactitol Sigma, Deisenhofen Luminol Sigma, Deisenhofen Natriumacetat Riedel-de Haën, Seelze Natriumhydrogencarbonat Riedel-de Haën, Seelze Natriumhydroxid Riedel-de Haën, Seelze Perhydrol 30% Merck, Darmstadt Poly-L-lysinhydrochlorid Aldrich, Steinheim Rinderserumalbumin (BSA), Fraktion V Sigma, Deisenhofen Xanthin (Na-Salz) Sigma, Deisenhofen Außer den hier aufgeführten Chemikalien wurden Produkte der Firmen Merck, Darmstadt und Aldrich, Steinheim in p.A. Qualität verwendet.
2. Material und Methoden 23 2.1.2 Enzyme Glucose-Oxidase a. Aspergillus niger, EC 1.1.3.4 (200 U/mg), Boehringer Mannheim Hexokinase aus Bäckerhefe, Typ III, EC 2.7.1.1 (20 U/mg), Sigma, Deisenhofen Xanthin-Oxidase aus Kuhmilch, EC 1.1.3.22 (0,1 U/mg), Boehringer Mannheim Peroxidase aus Meerrettich Typ VI-A, EC 1.11.1.7 (1000 U/mg), Sigma, Deisenhofen 2.1.3 Verwendete Puffer Clark & Lubs-Puffer (C&L): Zugabe eines individuellen Volumens von 0,1 M (50 mM) NaOH zu 500 ml einer 0,1 M Borsäure/KCl-Lösung bis zum Erreichen des erforderlichen pH-Wertes und Auffüllen auf 1000 ml Endvolumen mit H2O dest. Kaliumphosphat-Puffer (KPP): Mischen von 0,1 M K2HPO4 und 0,1 M KH2PO4 bis (0,1 M) zur Einstellung des gewünschten pH-Wertes CE-Puffer (10 mM): Mischen von 10 mM Borsäure und 10 mM NaHCO3 bis zur Einstellung von pH 9,2 Borat-Puffer (50 mM): 0,05 M Borsäure mit 1 M NaOH auf pH 9 eingestellt Acetat-Puffer (50 mM): 0,05 M Natriumacetat mit 1 M Citronensäure auf pH 2.1.4 Glas-Beads 5,5 eingestellt Controlled pore glass (CPG) Fluka, Deisenhofen Nucleosil 1000-5 Silica Beads Macherey-Nagel, Düren 2.1.5 Geräte 2.1.5.1 Fließinjektionssystem Peristaltische Pumpen: Meredos, Nörten Hardenberg Injektionsventil V 100: Perstorp Analytik GmbH, Rodgau
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5. Literatur 169 Hoffman, N.E.; Lia
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5. Literatur 171 Liu, Z.; Li, T.; W
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5. Literatur 175 Wei, H.; Wang, T.;
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