Entwicklung alternativer Methoden zur Nukleotid- Analytik in der ...

2. Material und Methoden 45
Der EOF ist damit umgekehrt proportional der Viskosität η des Elektrolyten,
proportional seiner Dielektrizitätskonstante ε, der angelegten Feldstärke E und dem
Zeta-Potential. Der elektroosmotische Fluß in Siliziumdioxid-Kapillaren wird mit
steigender Konzentration des Elektrolyten herabgesetzt und wächst mit dem pH-Wert
an, da mit steigendem pH der Dissoziationsgrad der Oberflächensilanolgruppen
erhöht wird. In Kapillaren mit einem Innendurchmesser von 25 bis 100 µm bildet sich
durch den EOF ein nahezu ideales pfropfenförmiges Strömungprofil aus, das im
Gegensatz zu einem hydrodynamischem Fluß kaum zu einer Bandenverbreiterung
beiträgt.
Unter Berücksichtigung des EOFs verändert sich die Gleichung zur Bestimmung der
Wanderungsgeschwindigkeit eines Analyten folgenderweise:
⋅E
= ( µ + µ )E ⋅
ui = µe ff EP EOF
Die resultierende Mobilität wird hierbei sowohl durch die elektrophoretische
Beweglichkeit µEP, die ausschließlich durch das angelegte elektrische Feld
hervorgerufen wird, als auch durch die elektroosmotische Mobilität µEOF bestimmt.
2.2.8.3 Detektion
Die Detektion in der CE wird in den meisten Fällen optisch direkt in der Kapillare
durchgeführt, nur in seltenen Fällen, wie z. B. bei der Kopplung mit einem Massen-
spektrometer, erfolgt der Nachweis der getrennten Analyte außerhalb der Kapillare.
Im Gegensatz zu chromatographischen Verfahren wandern die Probenbestandteile
mit unterschiedlicher Geschwindigkeit durch das Detektionsfenster, daher müssen
bei einer quantitativen Auswertung über die Peakflächen die unterschiedlichen
Verweilzeiten der Substanzen im Detektionsbereich berücksichtigt werden. Für die
optische Detektion steht nur die mittlere Weite des Kapillarinnendurchmessers als
Schichtdicke zur Verfügung, so daß die Empfindlichkeit im Vergleich zu anderen
Systemen geringer ausfällt. Kommerzielle CE-Systeme sind sowohl mit UV- als auch
mit Fluoreszenz-Detektoren verfügbar.
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