[download]13,2 Mb - Eco - Tiras

сервации спермы карпа. Это имеет место за счетснижения белков и повышения количество липидов,соответственно на 22,8 и 20,7 %. Полученныеданные согласуются с результатами исследований,представленных в работе В.А. Наука (1991). Однакоснижение количество белков может быть объяснено,в какой-то мере, их расщеплением до аминокислот,которые могут быть удалены в процессе выделениямембран, в связи с тем, что СН производится в гипотоническойсреде.Противоположные изменения в биохимическомсоставе мембран сперматозоидов карпа наблюдаютсяпри анализе содержания липидов. То есть, криоконсервацияприводит к повышению количество липидовв исследуемом объекте, что противоречит даннымспециальной литературы, где показано снижениеуровня липидов при снижение уровня температуры всилу интенсификации перекисного окисления их посвободному радикальному механизму [4]. Увеличениеколичество липидов в плазматических мембранахкарпа при криоконсервации может быть объясненодругими механизмами.Продолжая анализ данных табл. 2 следует отметитьснижение липидно-белкового соотношения от0,65±0,07 до 0,42±0,08. Эти изменения могут бытьспровоцированы нарушением межмолекулярных взаимодействийв данных биокомплексах за счет разрываслабых нековалентных связей, что приводит к изменениюструктуры и функции биологических мембран,и как следствие к нарушению целостности половыхклеток в процессе криоконсервации. Данные результатысогласуются с молекулярно–клеточной теориейкриоповреждения Белоуса [2]. Разрушение белковолипидныхкомплексов обусловлено их изменений зарядаионогенных групп белка, который зависит от рНсреды [7]. Такая дестабилизация приводит к нарушениюбарьерных функций плазматических мембран, иклеток в целом.Вторая составная частью спермы карпа представленосеменной плазмой, которая является для сперматозоидовдо их извержения. Для более широкогопредставления о криогенных изменениях в спермекарпа определено и изучено белково-липидное соотношениев ней. Данные этих опытов представлены втабл. 3.Цифровой материал, представленный в таблице3, демонстрирует некоторое повышение уровня белковв семенной плазме карпа, что можно объяснитьнарушением проницаемости плазматических мембрани миграции белков из клеток в плазму.Более выраженное изменение содержания липидовобусловлено, как и ожидалось, их перекиснымокислением. К этому, можно добавить и их динамическиесвойства, заключающиеся во вращении вокругоси, латеральном перемещение и явлением «флипфлопа»– перескакиванием с одной стороны липидногобислоя на другой [3]. Снижение содержаниялипидов семенной плазме карпа и повышение этогопоказателя в мембранах (табл. 2), предположительнодемонстрирует возможность «флип-флопа» липидови из семенной плазмы. В результате этого уменьшаетсябелково-липидное соотношение мембраны, чтоприводит к снижению функциональной активностисперматозоидов карпа. Белково-липидное соотношениев семенной плазмы несколько увеличивается заТаблица 3. Биохимические измененияв плазме спермы карпав процессе криоконсервацииСеменная плазма карпаИзученные показателиДеконсервиро-НативнаяваннаяСодержание белков, мкг/мл 20414,35 ± 304,34 21427,98 ± 493,73Содержание липидов,мкг/мл 7635,33 ± 227,77 6868,62 ± 250,95*Белково-липидноесоотношение2,67 ± 0,89 3,12 ± 0,43*статистически достоверны криогенные изменениясчет роста содержания белков и снижения такового улипидов.Таким образом, процесс криоконсервации спермыкарпа оказывает существенное влияние на её основныекомпоненты плазматических мембран сперматозоидови их функциональное состояние.Выводы1. В сперматозоидах карпа преобладают щелочерастворимыебелки, в то время как водо– и кислоторастворимыенаходятся в меньшинстве.2. В процессе криоконсервации спермы карпа наиболеестабильными являются кислоторастворимыебелки, а водо– и щелочерастворимые – более лабильными.3. В плазме спермы карпа преобладают белкинад липидами, а при анализе составных компонентовплазматических мембран отличается липидное превалирование.4. Особенности криогенных изменений составныхкомпонентов спермиев, плазматических мембрани семенной плазмы необходимо учитыватьпри разработке криотехнологий сохранения спермыкарпа.Литература1. Белоус А.М., Бондаренко В.А. Структурные изменения биологическихмембран при охлаждении. – Киев: Наукова Думка, 1982.–256с.2. Белоус А.М., Бондаренко В.А., Гулевский А.К. Молекулярно–клеточнаяконцепция криоповреждения клетки. Роль трансмембранныхдефектов // Криобиология, 1987. – № 2 – С.19 – 23.3. Болдорев А.А. Матриксная функция биологических мембран//СОЖ, 2001. – том 7. – № 7. – С. 2 – 8.4. Владимиров Ю.А. Биологические мембраны и незапрограмированаясмерть клетки.// СОЖ, 2000. – том. 6. – №9. – С. 35 – 43.5. Какпаков В.Т. Перспективы создания Российского геномногобанка. – Консервация генетических ресурсов. Пущино, 1996. С. 34– 36.6. Лакин Г.Ф. Биометрия. М; 1980. 296 с.7. Мэдди Э. Биохимическое исследование мембран. М. Мир.1979. 400 с.8. Наук В.А. Структура и функция спермиев сельскохозяйственныхживотных при криоконсервации. – Кишинёв: Штиинца,1991. –200с.9. Наук В.А., Борончук Г.В. Методика выделения плазматическихмембран гамет сельскохозяйственных животных// Известия АНМССР. Сер. биол. и хим. наук, 1993. – №1. – С. 50 – 53.10. Шапиев И.Ш., Мороз Л.Г., Никиткина Е.В. Влияние охлажденияи замораживания – оттаивания на дыхание сперматозоидов.– Мат. Международной конференции «Сохранение генетическихресурсов», С. – Петербург, 2004. С. 883 – 884.11. Critser J., Benson J. Fundamental cryobiology – material ofthe International conference “Preservation of genetic resources S.–Petersburg, 2004, P.758 – 759.12. Lowry O. H. Rosebrough N. J., Farr A. L., Randall K. J. Proteinmeasurments with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem., 1951.-Vol.193.-P.265 -275.— 19 —