[download]13,2 Mb - Eco - Tiras

Замораживание проводили при температуре 100-120 °С, а ее оттаивание при 40 °С. Статистическуюобработку цифрового материала проводили по Е.Меркурьевой с использованием критерия Стьюдента.Результаты исследований и их обсуждениеВ основу исследований по изысканию криопротекторов,как составных компонентов синтетическихсред, стабилизирующих структурно-функциональноесостояние в процессе криоконсервации спермы карпабыла положена концепция, согласно которой криоповреждениясперматозоидов различных видов животныхносит многофакторный характер и имеет место как засчет общих неспецифических, так частных, спецефическихреакций [2].Исходя из данной концепции для криоконсервацииспермы карпа не могут быть использованы известныесреды и технологические приемы, приемлемые длядругих видов животных.На первых этапах совершенствования сред дляспермы экспериментального вида животных изученаэффективность применения 1,3-бутиленгликоля в качествекриопротекторного агента. Результаты проведенныхопытов представлены в табл. 1.Данные таблицы 1 показывают, что 1,3 – бутиленгликольв концентрации 15 % от общего состава средыоказывает наибольший криопротекторный эффектпо отношению спермы карпа. Отклонения в меньшуюсторону демонстрирует его слабую эффективность,тогда как повышенная концентрация испытуемого веществаоказывается токсичной.Криозащитный эффект 1,3– бутиленгликоля можетбыть обусловлен наличием в его структуре специфическихфункциональных групп и его особенностямизамерзания при низких температурах.В следующей серии опытов была изучена результативностьприменения различных криопротекторовв случае криоконсервации спермы карпа. Результатыопытов представлены в табл. 2.Из данных таблицы следует, что из испытанныхамидов и гликолей наиболее эффективен 1,3-бутиленгликоль,в то время как акриламид и формамидоказались довольно токсичными, несмотря на то, чторядом исследователей амиды используют для криоконсервацииспермы других видов животных [6]. Следовательно,при отборе криопротекторов необходимоучитывать видовую специфичность замораживаемыхобъектов.Убедившись в том, что использование 1,3-бутиленгликолядля криоконсервации спермы карпаспособствует более эффективной стабилизации еефункциональных показателей по сравнению с другимикриопротекторами данный вариант среды былусовершенствован введением в ее состав новых антиоксидантов,эффективность применения которыхпредставлена в табл. 3.Из данных таблицы 3 следует, что применениеантиоксидантов различной природы в оптимальныхконцентрациях позволяет достигнуть подвижности оттаянныхсперматозоидов карпа в пределах 2,7 ± 0,41и 4,2 ± 0,21 балла. Наиболее эффективным оказалсябакланозид – стероидный гликозид, выделенныйиз баклажан и любезно представленный нам сотрудникамиИнститута генетики АН Молдовы. В данномслучае подвижность сперматозоидов (4,2 ± 0,21балла)оказалась незначительно лучшей по сравнению сконтрольной средой, где подвижность половых клетоксоставила 3,8 ± 0,21 балла. Из данного опыта можнозаключить, что сперма карпа обладает достаточномощной антиоксидантной системой, что делает излишнимэкзогенное введение их в состав защитныхсред спермы карпа.В связи с тем, что в контрольном варианте, рН средырегулируется использованием достаточно сильнойминеральной НСl среды, чтобы сгладить возможныерезкие изменения рН при незначительных колебанияхколичества НСl, нами изучена эффективностьприменения более «мягких» органических кислот.Результаты опытов представлены в табл. 4.Сравнительные испытания, представленные втаблице 4 показывают, что винная кислота, используемаядля доведения рН среды до 7,5 позволяет существенноповысить подвижность оттаянных сперматозоидовкарпа по сравнению с таковыми при использованиисоляной или янтарной кислоты. Именно виннаякислота была использована нами при создании новойсреды для криоконсервации спермы карпа состав которойпредставлен в табл. 5.Таблица 1. Определение оптимальной концентрации1,3–бутиленгликоля в составе криозащитной средыспермы карпаСодержание 1,3-бутиленгликоля в средеСредас 1,3-бутиленгликолемКонтроль средас глицерином10% 4.0 ± 0,36 3,7 ± 0,2115% 4,2 ± 0,41 3,7 ± 0,2120% 4,2 ± 0,21 3,7 ± 0,2130% 1,5 ± 0,36* 3,7 ± 0,21* различия статистически достоверныТаблица 2 . Эффективность различных криопротекторовпри консервации спермы карпаНаименованиеПодвижность оттаянных гаметкриопротекторов Опытный вариант Контроль с глицериномАкриламид 3,2 ± 0,21 3,8 ± 0,21Формамид 0,2 ± 0,17 4,0 ± 0,36*1,3-пропиленгликоль 3,7 ± 0,41 3,5 ± 0,411,3-бутиленгликоль 4,7 ± 0,41 4,8 ± 0,21* статистически достоверные различияТаблица 3. Определение эффективностиразличных антиоксидантовпри криоконсервации спермы карпа*Наименование Подвижность гамет после оттаиванияантиоксидантовОпытКонтрольДилудин 3,3 ± 0,21 3,8 ± 0,21Фенозан 3,8 ± 0,21 3,8 ± 0,21Бакланозид 4,2 ± 0,21 3,8 ± 0,21N -зид 3,3 ± 0,21 3,8 ± 0,21Глутатион 4,2 ± 0,41 3,8 ± 0,21Ионол 2,7 ± 0,41 3,8 ± 0,21* нет существенного различияТаблица 4. Эффективность поддержания рН средыспермы карпа различными соединениямиНаименование вещества Подвижность оттаянных спермиев, баллЯнтарная кислота 3,5 ± 0,36Винная кислота 4,8 ± 0,41*Соляная кислота (контр.) 3,3 ± 0,21* статистически достоверные результаты— 21 —