ПОДДЕРЖАНИЕ БИОРАЗНООБРАЗИЯ ДНЕСТРА МЕТОДОМ КРИОКОНСЕРВАЦИИ.СООБЩЕНИЕ 3. КРИОГЕННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ БЕЛКОВ И ЛИПИДОВНА ЭТАПАХ КОНСЕРВАЦИИ СПЕРМЫ КАРПАГ.В. Борончук, И.В. Балан, Н.В. РошкаИнститут физиологии и санокреатологии АН МолдовыKEEPING THE BIODIVERSITY IN NISTRU USING THE CRYOCONSERVATION METHODSPEAKING 3: CRYOGENIC CHANGES WHEN PRESERVING THE CRAP’S SPERMGh. Boronciuc, I. Balan, N. RoşcaUsing the cryopreservation technology of the carp’s sperm, in output conditions, allows to obtain a 77,0±3,0% roe’s fertilizing and 60,0±3,5%viable grub’s outlet.ВведениеРеализация достижений современной криобиологиив подержании биоразнообразия ихтиофауныДнестра и рыбном хозяйстве страны имеет значительнуюперспективу. В частности, создание низкотемпературногокриобанка половых продуктов, эмбрионови личинок рыб позволит сохранить ценный генетическийматериал на протяжении длительного времени.Криоконсервирования спермы высокоценных производителейможет найти широкое применение в селекционо–племеннойработе с различными культивированнымивидами рыб, как объектами аквакултуры [4].Существенный вклад решение проблемы криоконсервацииспермы карпа и других ценных и находящихсяна грани исчезновения видов рыб вносят исследователисоседних государств – России и Украины [1,2, 5].В предыдущих двух сообщениях мы изложилирезультаты изучения криогенных изменений белкови липидов, как составных компонентов плазматическихмембран сперматозоидов карпа. Представилиновый состав криозащитной среды и оптимальныепараметры, при которых данная среда проявляет максимальныйзащитный эффект. Целью проведенныхисследований, результаты которых представляютсяв заключительном сообщении было – провести производственноеиспытание разработанной технологиикриоконсервации спермы карпа.Материалы и методы исследованияОпыты проведены на Кучурганской научно–производительнойбазе Института зоологии АН Молдовы, сиспользованием спермы карпа Cyprinus carpio, полученнойпосле инъекции гипофизарных экстрактов поГербильскому [3]. Икра получена от самца весом 7 кгв возрасте 6 лет.После деконсервации спермы её смешивали с икройсухим методом (1:100), а затем высевали в водуна маркированные чашки Петри, размещенные на дне0,6 л. стаканов через 10 – 15 мин. после осеменениячашки Петри перенесены в аппарате Вейса и вертикальнозафиксированы в специальных держателях.В аппаратах Вейса поддерживали условия аналогичныепромышленным нормативам: температура водыравна 22–23 °С, содержание кислорода – 7–8,5 мг/л,проточность 3л/мин.В период инкубации икры в аппаратах Вейса проведенынаблюдения за качеством оплодотворения икрыи визуально рассчитан процент оплодотворенной икрына этапе дробления яйцеклетки. Кроме того, определенпроцент смертности яйцеклеток на этапе гаструляциии стадии обособления хвостового отдела желточногомешка (соответствующий этап органогенеза).С началом двигательной активности эмбрионапроводились наблюдения за интенсивностью движениязародышей в опытной и контрольных вариантах.Перед началом выклева эмбрионов из икры чашкиПетри с прикреплённой икрой были перенесеныв специальные микроинкубаторы, обеспечивающиенормальные условия выдерживания предличинок.В процессе выдерживания в микроинкубаторахбыли определены: процент смертности эмбрионов настадии выклева, процент предличинок с отклонениямиот нормального развития (уродство) на этапе эмбриогенезасогласно общеизвестным методическим положениям[6]. Рассчитан процент выхода деловых личинокот нативных и замороженных сперматозоидах карпа.В качестве контрольного промышленного вариантапроведено инкубация в аппаратах Вейса, а модельноговарианта в лабораторных условиях с использованиемнативной спермы. В опытном варианте инкубированиепроводилось без аппарата Вейса при осеменение икрыкриоконсервированой спермы карпа.Статистической обработкой проводили с применениесовременных программ Excel, статистика и др.Результаты исследований и их обсуждениеАнализируя информацию о биогидроресурсахбассейна Днестра следует отметить неоценимыйвклад при изучении этого вопроса академиков М.Ф.Ярошенко, И.К. Тодераша, профессора Ф.П. Чорика[9] нам более ясно представляется необходимостьсохранения биоразнообразия ихтиофауны Днестра.Результаты проведенных нами исследования представленыв таблице.Данные, представленные в таблице показывают,что разработанная технология позволяет достигнутьмаксимальной оплодотворяемости икринок, составляющей77,0±3,0 %, а выводимости жизнеспособныхличинок – 60,0±3,5% (третья серия опытов), вместе стем, во второй и первой серии изучаемые показателизначительно ниже, что свидетельствует о индивидуальнойособенности икры, так как она от всех трех самокосеменялась спермой одного самца. Аналогичныеиндивидуальные особенности выявлены у спермыкарпа, когда икра одной самки осеменялась спермойразличных трех самцов.Кроме того, из данной таблицы следует что, криконсервацияспермы карпа оказывает достоверноевлияния только на процент оплодотворенных яйцеклетоки выход жизнеспособных личинок.— 23 —
Таблица. Результаты производственных опытов по осеменению икры карпаИсследованные показатели Опытный вариант Промышленный контроль Модельный контрольПервая серия опытов (самка № 1)Процент оплодотворения 60,0 ± 3,5 96,0 ± 0,14 92,0 ±1,9Отход на стадии гаструляции, % 10,0± 2,1 5,0± 1,5 8,0 ± 1,9Отход на стадии обособления хвостового отдела, % 8,0 ±1,9 5,0 ± 1,5 8,0 ±1,9Отход на стадии выклева эмбрионов, % 8,0 ±1,9 3,0 ± 1,2 10,0± 2,1Процент уродливых предлечинок 3,5 ±1,3 2,6 ±1,1 3,0 ± 1,2Отход на стадии набора воздуха в плавательный пузырек, % 9,0 ± 2,0 3,0 ±1,2 8,0 ± 1,9Процент выхода жизнестойких личинок 40,0 ±3,8 80,0 ± 2,8 65,0 ± 3,4Вторая серия опытов (самка № 2)Процент оплодотворения 20,5 ±2,8* 80,0 ±2,8* 77,0 ±3,0*Отход на стадии гаструляции, % 10,0 ± 2,1 5,0 ± 1,5 8,0 ± 1,9Отход на стадии обособления хвостового отдела, % 10,0 ± 2,1 5,0 ± 1,5 8,0 ±1,9Отход на стадии выклева эмбрионов, % 10,0 ± 2,1 3,0 ± 1,2 10,0± 2,1Процент уродливых предлечинок 3,5± 1,3 2,0 ± 1,0 3,5 ± <strong>13</strong>Отход на стадии набора воздуха в плавательный пузырек, % 10,0 ± 2,1 3,0 ±1,2 7,0 1,8Процент выхода жизнестойких личинок 12,4 ± 2,3* 65,0 ± 3,4* 50,0 ±3,5*Третья серия опытов (самка № 3)Процент оплодотворения 77,0 ± 3,0* 97,0 ± 1,2 95,0 ± 1,5Отход на стадии гаструляции, % 8,0 ± 1,9 4,0 ± 1,4 6,0 ±1,7Отход на стадии обособления хвостового отдела, % 8,0 ± 1,9 6,0 ± 1,7 7,0 ±1,8Отход на стадии выклева эмбрионов, % 4,0 ±1,4 4,0 ± 1,4 6,0 ±1,4Процент уродливых предлечинок 2,5 ±1,1 2,0 ± 1,0 2,0 ±1,0Отход на стадии набора воздуха в плавательный пузырек, % 4,0 ±1,4 4,0 ±1,4 5,0 ± 1,5Процент выхода жизнестойких личинок 60,0 ±3,5* 82,0 ± 2,7 75,0 ± 3,0**статистически достоверны различия по сравнению с первой серией опытовДальнейшее эмбриональное развитие происходитбез заметных отклонений от показателей контрольныхвариантов. Некоторое ухудшение изученныхпоказателей по сравнению с таковыми в промышленныхусловиях связано, скорее всего, ещё и с тем, что вопытах икру инкубировали в прикрепленном на чашкуПетри состоянии, где она в большей степени поражаласьпаразитическими грибками, чем в промышленныхусловиях.Таким образом, результаты производственногоиспытания разработанной криотехнологии свидетельствуето возможности сохранения спермы карпав глубоко замороженном состоянии. Однако оно непозволяет в полной мере использовать генетическийпотенциал производителей, что оставляет поле деятельностидля дальнейших исследований, при этомследует учесть, что жизнеспособность криоконсервированнойспермы карпа не претерпевает значительныхизменений при хранении её в условиях сверхнизкихтемператур на протяжении длительного времени(1–14 лет) [7,8], что особенно ценно при решение проблемсохранения биоразнообразия организмов, относящихсяк животному миру.В период бурного развития криобиологии, когдакриконсервация признана без альтернативным методомдлительного хранения биологических объектов,она будет способствовать сохранению видового разнообразияживотного и растительного мира Земли, использованиюстволовых клеток в науке и медицинскойпрактике, а также тканей и органов в трансплантологии,когда открываются возможности создания космическихкриообанков необходимо стремиться к раскрытию всегомодификационного спектра и изысканию возможностейповышения эффективности криозащиты живыхсистем, находящихся, по образному выражению [10], всостоянии «замороженном во времени». Всё остаётсяещё множество требующих решения молекулярных,биохимических и биофизических проблем. Как клеткиреагирует на процессы криконсервации? Как помочьим лучше сохранить структурно функциональный гомеостазпосле деконсервации именно здесь необходимосконцентрировать свои исследования в будущем.Выводы1. Разработанная технология криоконсервацииспермы карпа позволяет использовать её в селекционно–племеннойпрактике разведения карпа.2. Для карпа характерна не только видовая, но ииндивидуальная специфичность оплодотворяемостиспермы и выводимости жизнеспособных личинок, чтонеобходимо учитывать при отборе спермы для её криоконсервации.3. Перспективными исследованиями при криконсервацииспермы карпа являются изыскания новыхкриопротекторов с более широким спектром действия,способные, в первую очередь, смещать точку эвтетикив зону более низких температур.Литература1. Ананьиев В.И., Манохина М.С., Виноградов М.Е. Проблемысоздания криотехнологий для низкотмпературных банков аквакультуры,сохранения геномов редких и исчезающих редких видов рыб.– Материалы Междунар. Конф. «Сохранение генетических ресурсов».С. Петербург, 2004. С. 764 – 766.2. Бех В.В. Криоконсервация спермы карпов Украины. – МатериалыМеждунар. Конф. «Сохранение генетических ресурсов». С.Петербург, 2004. С. 769.3. Гербильский Н.Л. Метод гипофизарных инъекций и его рольв рыбоводстве. – Метод гипофизарных инъекций и его роль в воспроизводстверыбных запасов. Л.: ЛГУ, 1941. С. 5 – 35.4. Гинсбег А.С. Оплодотворение у рыб и проблемы полиспермии.М.:, Наука, 1968. 357 с.5. Земков Г.В. Оценка качества протекторов в различных условияхкриконсервации спермиев рыб. – Материалы Междунар. Конф. «Сохранениегенетических ресурсов». С. Петербург, 2004. С. 795 – 796.6. Иванов И.Ф., Ковальский П.А. Цитология, гистология, эмбриология.– М.: Колос, 1976. 446 с.7. Копейка Е.Ф. Низкотемпературная консервация спермырыб. – Механизмы криповреждения и криозащиты биологическихобъектов. Тезисы второй Всес. конф. Харьков, 1989. том 2. С. 23.8. Цветкова Л.И., Докина О.Б., Пронина Н.Д. и др. Использованиегентического криобанка для сохранения генофонда рыб – объектоваквакультуры. – Материалы Междунар. конф. «Сохранениегенетических ресурсов». С. Петербург, 2004. С. 877.9. Чорик Ф.П. Вклад академика АН СССР. М.Ф. Ярошенко визучение биологических ресурсов водоёмов бассейна Днестра.– Биогидроресурсы бассейна Днестра, их охрана и рациональноеиспользование. Кишинёв «Штиинца» 1980. С. 3 – 8.10. Fuller B., Green C., Grichenko V.I. Cryopreservation for cellbanking: current concepts at the turn of the 21 st Century. – Problems ofcriobiology, 2003. N2. 62 – 83.— 24 —
- Page 3 and 4: Descrierea CIP a Camerei Nationale
- Page 5 and 6: Уважаемые коллеги,
- Page 7 and 8: щегосударственной
- Page 9 and 10: доме, в котором мы в
- Page 11 and 12: шие глубины на заде
- Page 13 and 14: с малыми восстанов
- Page 15 and 16: Литература1. Жадин
- Page 17 and 18: Рис. 3. Многолетняя
- Page 19 and 20: тера и глубины изме
- Page 21 and 22: ПОДДЕРЖАНИЕ БИОРАЗ
- Page 23: Таблица 5. Оптималь
- Page 27 and 28: ФОРМИРОВАНИЕ БИОЦЕ
- Page 29 and 30: Подавляющее больши
- Page 31 and 32: Рис.1. Днестр вблизи
- Page 33 and 34: сопоставимости дан
- Page 35 and 36: ции с международны
- Page 37 and 38: А.Н. Бургеля, К.П. Бу
- Page 39 and 40: Выводы1. Уже на само
- Page 41 and 42: тегории, виды и пор
- Page 43 and 44: санитарно-эпидемио
- Page 45 and 46: Таблица 4. Распреде
- Page 47 and 48: реационных, монито
- Page 49 and 50: Шабановой Г.А. и Кух
- Page 51 and 52: могут быть убраны,
- Page 53 and 54: Турунчук. Связь с с
- Page 55 and 56: Праздник «День Рек
- Page 57 and 58: 500ЈPРис. Распределе
- Page 59 and 60: Н. Гроссу * , Р. Шакир
- Page 61 and 62: Рис.1. Помесячное ра
- Page 63 and 64: Calitatea apei r. Nistru conform gr
- Page 65 and 66: Карта геохимическо
- Page 67 and 68: лесу был дуб, сегод
- Page 69 and 70: При предварительно
- Page 71 and 72: щих улучшить социа
- Page 73 and 74: ней опасных загряз
- Page 75 and 76:
ФотоприложениеФот
- Page 77 and 78:
в Украине - одесска
- Page 79 and 80:
тия по гидрохимиче
- Page 81 and 82:
ветствующих санита
- Page 83 and 84:
ния полей, так и для
- Page 85 and 86:
В. Экономический ан
- Page 87 and 88:
Таким образом, плат
- Page 89 and 90:
Рис. 2. Динамика нор
- Page 91 and 92:
Табл. 1а. Статистиче
- Page 93 and 94:
Выводы1. Наибольшее
- Page 95 and 96:
Для днестровской в
- Page 97 and 98:
ЭКОЭТИЧЕСКОЕ ВОСПИ
- Page 99 and 100:
Таблица 1. Валовое с
- Page 101 and 102:
почвенный покров п
- Page 103 and 104:
always been the public concern of b
- Page 105 and 106:
и уникальными по си
- Page 107 and 108:
ются основными фак
- Page 109 and 110:
Рис. 4. Пораженность
- Page 111 and 112:
ight to use”. Varone et al. (2002
- Page 113 and 114:
mass media, etc., which belong to d
- Page 115 and 116:
В связи с тем, что К
- Page 117 and 118:
период поездки вых
- Page 119 and 120:
doutchinae (d’Orb.), выше з
- Page 121 and 122:
вместе с осадками в
- Page 123 and 124:
Таблица 4. Содержан
- Page 125 and 126:
efectuat în baza următorilor indi
- Page 127 and 128:
видуальных различи
- Page 129 and 130:
- соответствующее з
- Page 131 and 132:
ФАУНА КЛЕЩЕЙ ДРЕВЕ
- Page 133 and 134:
Таблица 1. Данные ра
- Page 135 and 136:
РЕКРЕАЦИОННЫЕ РЕСУ
- Page 137 and 138:
ЭТАПЫ ЭВОЛЮЦИИ БИО
- Page 139 and 140:
Плотина Дубоссарск
- Page 141 and 142:
чимые. При этом «пе
- Page 143 and 144:
Схематически получ
- Page 145 and 146:
Таблица 5. Данные на
- Page 147 and 148:
Risks for biodiversity with tested
- Page 149 and 150:
14. Ярошенко M.Ф., Дед
- Page 151 and 152:
20082009Fig. 2. Structure of shrew
- Page 153 and 154:
с природой (различн
- Page 155 and 156:
делить в их предела
- Page 157 and 158:
Таблица. Оценка эне
- Page 159 and 160:
лах Приднестровья
- Page 161 and 162:
ВыводыКраеведческ
- Page 163 and 164:
вий среды жизнедея
- Page 165 and 166:
Senecio besserianus Minder. Cypripe
- Page 167 and 168:
Рис.1. Почвенная кар
- Page 169 and 170:
половины площади п
- Page 171 and 172:
Рис. 2. Современное
- Page 173 and 174:
ПРИЧИНЫ ГЕОМОРФОЛО
- Page 175 and 176:
RÂURILE MICI CU ŞANSE MARIDE A FI
- Page 177 and 178:
ЭКОНОМИКО-ЭКОЛОГИЧ
- Page 179 and 180:
прибрежной зоной (п
- Page 181 and 182:
Строительство в пр
- Page 183 and 184:
государственного у
- Page 185 and 186:
ческий, социальный
- Page 187 and 188:
ми, послужило весом
- Page 189 and 190:
губительно влияющи
- Page 191 and 192:
ных за контролем и
- Page 193 and 194:
PECULARITIES OF DYNAMICS OF PHOSPHO
- Page 195 and 196:
Fig. 4. Spatial and seasonal dynami
- Page 197 and 198:
• inventory of point discharges s
- Page 199 and 200:
СТЕРИЛИЗАЦИЯ КАК С
- Page 201 and 202:
гормоны (в незначит
- Page 203 and 204:
ПРОТОКОЛ ПО ПРОБЛЕ
- Page 205 and 206:
воды ежегодно умир
- Page 207 and 208:
РАЗРАБОТКА ПЛАНОВ
- Page 209 and 210:
ставляет материаль
- Page 211 and 212:
• Совершенствован
- Page 213 and 214:
«Алые паруса». Таки
- Page 215 and 216:
which the Committee is then require
- Page 217 and 218:
нием, культурой и х
- Page 219 and 220:
- Николаевская церк
- Page 221 and 222:
Сброшенный на 50 м б
- Page 223 and 224:
СТРУКТУРА ГЕОИНФОР
- Page 225 and 226:
4. Пространственная
- Page 227 and 228:
На фазе пика числен
- Page 229 and 230:
А.А. Тищенков, В.В. М
- Page 231 and 232:
Распределение видо
- Page 233 and 234:
цветковый (ККП, ЧКУ,
- Page 235 and 236:
очередной задачей
- Page 237 and 238:
схемой планировани
- Page 239 and 240:
эксплуатационным п
- Page 241 and 242:
ных дамб, с возвращ
- Page 243 and 244:
ледствия от урбани
- Page 245 and 246:
ОСНОВНЫЕ ФОРМЫ ДЕГ
- Page 247 and 248:
УЧАСТИЕ НЕПРАВИТЕЛ
- Page 249 and 250:
струкции как от сбр
- Page 251 and 252:
Рогоз широколистны
- Page 253 and 254:
Таблица 3. Изменени
- Page 255 and 256:
В рамках первых тре
- Page 257 and 258:
Основные экскурсио
- Page 259 and 260:
2. Кравченко Е.Н. При
- Page 261 and 262:
Decision-Maker user group are respo
- Page 263 and 264:
может ее запускать,
- Page 265 and 266:
поражения населени
- Page 267 and 268:
тию РДЮЦ «ГУТТА - кл
- Page 269 and 270:
мость разработки н
- Page 271 and 272:
Биология. Подорожн
- Page 273 and 274:
банизированных тер
- Page 275 and 276:
Результаты исследо
- Page 277 and 278:
площадь ассимиляци
- Page 279 and 280:
Рис. 3. Дендрограмма
- Page 281 and 282:
Рис.1. Сезонная дина
- Page 283 and 284:
Молдовы и Приднест
- Page 285 and 286:
Ребята приехали в 10
- Page 287 and 288:
Рис. 1. Численность
- Page 289 and 290:
жений, в том числе э
- Page 291 and 292:
[4]. Несомненно, выжи
- Page 293 and 294:
КОНСТИТУЦИОНАЛЬНА
- Page 295 and 296:
В настоящее время б
- Page 297 and 298:
8. Суворцева В.Ю., Ру
- Page 299 and 300:
Окончание табл. 2Ок
- Page 301 and 302:
содержаниеПРЕДИСЛ
- Page 303 and 304:
А.П. Погребняк, В.Ф.
- Page 305:
Научное изданиеБАС