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Ce document numérisé est le fruit d'un long travail approuvé par le ...

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c) Etude ultrastructura<strong>le</strong> ciliaire en microscopie é<strong>le</strong>ctronique<br />

L'étude en microscopie é<strong>le</strong>ctronique du prélèvement biopsique fixé puis inclus <strong>est</strong><br />

<strong>long</strong>ue et diffici<strong>le</strong> car el<strong>le</strong> doit porter sur un nombre suffisant de coupes ciliaires<br />

interprétab<strong>le</strong>s pour autoriser une extrapolation des constatations. Les anomalies<br />

ultrastructura<strong>le</strong>s ciliaires peuvent varier selon <strong>le</strong> site de prélèvement mais éga<strong>le</strong>ment au sein<br />

<strong>d'un</strong> même groupe de cellu<strong>le</strong>s ciliées. De plus la mise en évidence, au niveau de quelques<br />

cils, d'anomalies de l'axonème ne s'accompagne pas nécessairement <strong>d'un</strong>e diminution de<br />

l'épuration muco-ciliaire. Ainsi, la quantification en microscopie optique du pourcentage de<br />

cellu<strong>le</strong>s ciliées mobi<strong>le</strong>s <strong>est</strong> une méthode fiab<strong>le</strong> pour évaluer <strong>le</strong>s anomalies ciliaires.<br />

• La fixation<br />

La fixation classique au glutaraldéhyde et osmium rend <strong>par</strong>fois diffici<strong>le</strong> l'analyse de<br />

certaines structures de l' axonème, et notamment des bras de dynéine. Une technique de<br />

fixation relativement récente utilise un mélange d'acide tannique et de glutaraldéhyde avec<br />

post-fixation dans du tétraoxyde osmique. Sa densité é<strong>le</strong>ctronique étant meil<strong>le</strong>ure, <strong>le</strong>s images<br />

obtenues sont plus nettes permettant une analyse fine de tous <strong>le</strong>s composants du<br />

cytosque<strong>le</strong>tte.<br />

Une des caractéristiques de la fixation <strong>est</strong> qu'el<strong>le</strong> doit être rapide pour éviter <strong>le</strong>s lésions<br />

ultrastructura<strong>le</strong>s induites <strong>par</strong> la lyse cellulaire.<br />

• Analyse histologique<br />

Après inclusion et fixation du prélèvement, celui-ci bénéficie de coupes fines (4 um) qui<br />

permettent de sé<strong>le</strong>ctionner <strong>le</strong>s plages contenant des cils, puis de coupes ultrafines (0,05-0,5<br />

um) sur <strong>le</strong>squel<strong>le</strong>s s'effectuent l'analyse proprement dite. Les coupes doivent être aussi<br />

perpendiculaires que possib<strong>le</strong> aux axes des cils et réalisées idéa<strong>le</strong>ment à mi-hauteur des cils.<br />

En effet, <strong>le</strong>s bras de dynéine sont absents aux extrémités apica<strong>le</strong>s et basa<strong>le</strong>s des cils, et <strong>le</strong>s<br />

microtubu<strong>le</strong>s centraux s'arrètent à environ 1 um de la surface cellulaire. La <strong>par</strong>tie apica<strong>le</strong> du<br />

cil <strong>est</strong> reconnue <strong>par</strong> un diamètre transversal plus petit (environ 0,15 um). La <strong>par</strong>tie basa<strong>le</strong> <strong>est</strong><br />

reconnue <strong>par</strong> la présence de microvillosités entre <strong>le</strong>s cils.<br />

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