Materiali e Tecnologie per la realizzazione di sostituti - FedOA ...

Figura 51: Sistema di semina dinamica
MATERIALI, METODI E STRUMENTAZIONE - 113
b) Test di vitalità cellulare: Alamar Blue reduction
L’AB reduction è un nuovo metodo che consente di misurare la vitalità cellulare
attraverso un indicatore di vitalità cellulare, l’Alamar Blue.
Esso è un colorante (tetrazolium salt) che è in grado di essere ridotto da
composti presenti nella matrice extracellulare a formare un prodotto che
fuoriesce dalla membrana cellulare e può essere quantificato mediante un’analisi
allo spettrofotometro a fluorescenza.
E’ evidente che tanto maggiore sarà la percentuale di prodotto ridotto tanto
maggiore sarà il numero di cellule che l’hanno determinato.
In altri termini il metodo AB reduction fornisce una misura indiretta della vitalità
e della proliferazione cellulare attraverso la percentuale di riduzione dei prodotti
della reazione di riduzione dell’Alamar Blue con composti della matrice
extracellulare.
In particolare la percentuale di riduzione può essere calcolata dallo
spettrofotometro attraverso una misura di assorbenza dell’Alamar Blue a due
diverse lunghezze d’onda (λ1=570nm e λ2=600nm) secondo la seguente
relazione:
( ε
ox
% reduced =
( ε
600
red 570
) ⋅ A
) ⋅ A
570PCL
600CRT
− ( ε
− ( ε
ox570
red 600
) ⋅ A
) ⋅ A
600PCL
570CRT