Materiali e Tecnologie per la realizzazione di sostituti - FedOA ...

88 - CAPITOLO 4
La procedura seguita consta delle seguenti fasi:
1. La preparazione della fase acquosa interna (fase dispersa) ottenuta dalla
dissoluzione di un’opportuna percentuale di polivinilalcool (PVA) (Aldrich
Chemical Company, 87-89% idrolizzato, Mw: 13000÷23000) in una soluzione
salina (PBS) (OXOID ph 7,3) di 1 ml, mediante agitazione magnetica alla
temperatura di circa 100°C. Tale soluzione, raffreddata a temperatura
ambiente, viene addizionata con lo 0,45% di BSA (Bovine Serum
Albumine) (Sigma Aldrich Chemical Company, Mw: 68000 ).
La presenza di un agente emulsionante nella fase acquosa interna favorisce
la stabilità dell’emulsione primaria e l’incapsulamento delle proteine.
2. La soluzione polimerica (fase disperdente/fase dispersa) è stata ottenuta
dissolvendo il policaprolattone in diclorometano mediante agitazione
magnetica a temperatura ambiente al fine di formare un sistema
monodisperso.
3. La fase acquosa esterna (fase disperdente) è stata preparata dissolvendo
diverse percentuali di PVA in 250 ml di PBS mediante agitazione
magnetica alla temperatura di circa 100°C.
4. La fase acquosa interna viene emulsionata per un tempo opportuno con la
soluzione polimerica utilizzando un sonificatore con potenza di 50 W
(GRANT ULTRASONIC BATH XB3, 50-60Hz, 60W) (Fig.43) in modo
d a consentire l’incapsulamento della BSA all’interno della fase polimerica.
5. Il prodotto della prima emulsione (W/O) viene iniettato nella fase
acquosa esterna utilizzando una siringa di vetro.
Tale soluzione viene miscelata per trenta minuti utilizzando un agitatore
magnetico (FALC Instruments mod. F60) a temperatura ambiente ed
impostando un’opportuna velocità di agitazione (Fig. 43).
6. Al fine di rimuovere il diclorometano viene aggiunta una soluzione salina
(PBS) di 640 ml contenente la stessa concentrazione di PVA della fase
acquosa interna ad una velocità di 3 ml/min. In queste condizioni il
solvente contenuto nelle microsfere polimeriche viene estratto dal mezzo
acquoso (non solvente per il polimero), accelerandone la rimozione.
7. Successivamente le microsfere solide vengono filtrate e sottoposte a tre
lavaggi successivi con acqua bidistillata per eliminare l’agente
emulsionante.
8. Infine, le microsfere così ottenute vengono lasciate essiccare sotto cappa
chimica.