Dissertation Klaus Heitkamp 1999

4 Ergebnisse und Diskussion 93Aktivität =∆c∆t∆E⋅V=ε ⋅ d ⋅ v ⋅ ∆tGleichung 4(∆c = Konzentrationsänderung in mol; ∆t = Beobachtungszeitraum in min; ∆E = Extinktionsänderung;d = Schichtdicke in cm; V = Gesamtvolumen in l; v =Probevolumen in l;ε = molarer dekadischer Extinktionskoeffizient in lÂPRO -1 ÂFP -1 ;)Um eine Aussage über den Einfluß der in dieser Arbeit eingesetzten verschiedenen Beadsortenauf die Aktivität der immobilisierten Mikroperoxidase zu treffen, wurde das bei derAktivitätsbestimmung von immobilisierter Glucoseoxidase verwendete HPLC-System (vgl.Kapitel 6.6.4) und auch die dort genutzte Reaktion zur Hydroperoxidbestimmung mit4-Aminoantipyrin (vgl. Abbildung 41) erneut eingesetzt. Die Anwesenheit von Glucose undMeerrettichperoxidase war in diesem Falle jedoch nicht nötig. Es wurde deshalb nur mit deroben beschriebenen Lösung 1 (0,14 g Phenol und 0,25 g 4-Aminoantipyrin in 50 ml10 mmol/l Phosphatpuffer pH 7) gearbeitet. Zur Messung wurde diese Lösung mit Phosphatpufferim Verhältnis 1:20 verdünnt. Die HPLC-Anlage wurde vor jeder Meßreihe gründlichmit verdünnter Reagenzlösung bei einer Flußrate von 1 ml/min gespült. Das Gesamtreaktionsvolumenin dem modifizierten HPLC-System betrug bei jeder Messung 100 ml. Nacheinanderwurden mehrfach in kurzen Zeitabständen jeweils 100 µl einer Wasserstoffperoxid-Lösung(10 mmol/l) hinzugegeben und der Extinktionsanstieg bei 492 nm verfolgt. Dabei ergab sicheine Kurve mit mehreren Stufen. In Abbildung 43 ist als Beispiel eine solche Kurve für einenmit der Beadsorte 50/63,2 gefüllten Reaktor dargestellt. Der Anstieg der Extinktion proZeiteinheit in den einzelnen Stufen wurde analog Gleichung 4 der Aktivität derimmobilisierten Mikroperoxidase gleichgesetzt. Auf diese Weise wurde die Enzymaktivitätbei den vier mit verschiedenen Beadsorten gefüllten Reaktoren bestimmt.