Dissertation Klaus Heitkamp 1999

68 4 Ergebnisse und Diskussion4.4 Entwicklung einer Detektionsmethode zum selektiven Nachweis von Lipidhydroperoxidenin der Normalphasen-HPLCWie in Kapitel 3.3.2.1 bereits erläutert, finden sich in der Literatur nur wenige Methoden zurselektiven Bestimmung von Lipidhydroperoxiden in der Normalphasen-HPLC. Um die obenbeschriebene Trennleistung mit einer selektiven Nachweismethode zu verbinden, wurde deshalbein neues Nachsäulenderivatisierungsverfahren entwickelt.4.4.1 VorüberlegungenAufgrund des in der NP-HPLC als Eluent eingesetzten Lösungsmittelgemisches mit hohemHexan-Anteil wurden einige besondere Anforderungen an ein geeignetes Reaktionssystemgestellt:- Die Reaktion mußte in einem mit Hexan mischbaren Lösungsmittel ablaufen. Der Einsatzwäßriger oder methanolischer Lösungen schied somit aus.- Sowohl das Reagenz als auch das Reaktionsprodukt mußten unter den gegebenen Bedingungen,d.h. in einem Lösungsmittelgemisch mit hohem Hexan-Anteil, löslich sein, umnach der Zudosierung ein Verstopfen der Kapillaren zu verhindern.- Die Reaktion des Hydroperoxids mit dem Reagenz sollte zu einer möglichst großenÄnderung der UV/VIS-Aktivität oder der Fluoreszenzeigenschaften der Probenlösungführen.- Die Reaktion sollte möglichst ohne Katalyse ablaufen. Der Einsatz enzymkatalysierterReaktionen, wie sie bei der RP-HPLC eingesetzt wurden, schien wegen des hohen Hexananteilsnicht sinnvoll.Anhand dieser Vorgaben wurden einige Substanzen als Nachsäulenderivatisierungsreagenziengetestet (Tabelle 17). Als Hydroperoxidstandard diente dabei eine Lösung von 13S-HPOD miteiner Konzentration von 1 mmol/l.