Dissertation Klaus Heitkamp 1999

4 Ergebnisse und Diskussion 634.3 HPLC-Trennung von Lipidhydroperoxiden an NormalphasenWie in Kapitel 3.3.2.1 bereits erläutert, ist an Normalphasen die Trennung isomerer Lipidhydroperoxidemöglich. In der Literatur beschriebene Trennungen lassen sich aber aufgrundder großen Empfindlichkeit der Trennsysteme gegenüber äußeren Einflüssen nur mit Schwierigkeitenauf andere HPLC-Systeme übertragen, da sich z. B. schon geringe Änderungen inder Polarität des Eluenten (durch Zusatz entsprechender Komponenten oder durch Anwesenheitvon Wasser) sehr stark auf die Trennleistung auswirken. Die in der Literatur am häufigstenbeschriebene mobile Phase ist das Gemisch von Hexan und 2-Propanol im Verhältnis99:1, das auch in dieser Arbeit eingesetzt wurde.Durch Chromatographie an Kieselgel (LiChrospher Si 60) gelang es, den Reaktionsverlauf beider photosensibilisierten Oxidation von Fettsäuremethylestern zu verfolgen (Kapitel 4.1.3).Dazu wurden in festgelegten Zeitabständen dem Reaktionsansatz Proben entnommen unddiese durch Filtrieren über Kieselgel vom Methylenblau und dessen Oxidationsproduktenbefreit. Die Detektion erfolgte bei 200 und bei 234 nm, wodurch für Linol- und Linolensäuremethylestereine Zuordnung der Peaks zu den entstandenen Hydroperoxiden mit konjugierterbzw. nichtkonjugierter Doppelbindung möglich war (vgl. Abbildung 29-34). ZurErläuterung der Abkürzungen siehe Anhang, Kapitel 6.1 und 6.2.807060Intensity (mV)5040302027,4228,161030,52020 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35Retention Time (min)Abbildung 29Trennung der Hydroperoxide des Ölsäuremethylesters an LiChrospherSi 60 mit Hexan/2-Propanol 99/1; Detektionswellenlänge 200 nm;Reaktionszeit 14 Stundent r = 27,42 min, 28,16 min: 9-HPO-Me-Ester, 10-HPO-Me-Ester