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EL IMPACTO DE LOS FONDOS MIXTOS EN EL DESARROLLO REGIONAL
(Kozuka y col., 2000); y 3) integración del ADN viral al genoma celular (el marco de lectura
abierto del gen E2, cuyo producto reprime al promotor P97 de los genes E6 y E7, es
interrumpido o destruido preferentemente durante la integración) (Swan y col., 1999).
La integración del genoma viral es más frecuente en las lesiones de alto grado y también
parece aumentar la velocidad de progresión hacia el cáncer invasor (Nagao y col., 2002).
VPH genitales: tipos de alto y bajo riesgo
Se reconocen más de 100 tipos de VPH, de los cuales unos 40 infectan el aparato genital
(De Villiers, 2001).
Se consideran de bajo riesgo (VPH-BR) los tipos que se encuentran en verrugas y lesiones
benignas, y de alto riesgo los que se encuentran en carcinomas (VPH-AR). Los principales
VPH-BR son once (6, 11, 40, 42, 43, 44, 54, 61, 70, 72, 81), y los VPH-AR son 15 (16, 18,
31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 y 82) (Muñoz y col., 2003).
Algunas variantes de VPH más oncogénicas tienen mayor prevalencia en países en
desarrollo, donde contribuyen a las elevadas tasas de incidencia y mortalidad. En México,
25% de los casos de CaCu invasor se atribuyen a la variante asiático-americana (AA) de
VPH16, y la probabilidad de desarrollar cáncer invasor por esta variante es mayor que
por la variante europea (Berumen y col., 2001).
La amplificación por PCR es el método más flexible para abordar la detección,
genotipificación, carga viral, secuenciación y análisis de mutantes de VPH (Monk y col.,
1994; Schiffman y col., 1991). Es también el método más sensible, pues permite detectar
desde 10 moléculas de genoma viral presentes en una muestra.
El método de PCR-RFLP (Fujinaga y col., 1991) consiste en la amplificación de secuencias
de VPH para obtener productos de una región del genoma que luego son sometidos
al análisis del polimorfismo de la longitud de sus fragmentos de restricción (en inglés,
restriction fragment length-polymorphism, RFLP). Constituye la tecnología de entrada a
los métodos de tipificación (Hubbard, 2003) y es el más sencillo para detectar cambios
de secuencia, porque los instrumentos necesarios para llevarla a cabo son accesibles y
no requiere isótopos radiactivos (Mas-Oliva, 2004).
Nosotros empleamos un método de PCR-RFLP para detectar los siete tipos más
frecuentes de VPH-AR genitales (López-Revilla y col., 2008), pero para este proyecto
decidimos usar el método de PCR multiplex anidada (PCR-MA) de Sotlar y col. (2004),
que permite identificar 20 tipos de VPH genitales: 13 de alto riesgo y siete de bajo riesgo.
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