23. Ulusal Biyokimya Kongresi Özel Sayısı - Türk Biyokimya Dergisi

XXIII. ULUSAL B‹YOK‹MYA KONGRES‹
29 Kasım - 2 Aralık 2011
Hilton Hotel - Adana
23. Ulusal Biyokimya Kongresi, Adana [23 rd National Biochemistry Congress, Adana / TURKEY]
İÇİNDEKİLER
P. 073 / G6PD B+ VE G6PDAKDENİZ AKTİVİTESİ ÜZERİNE
HOMOSİSTEİN, SİSTEİN VE N-ASETİL SİSTEİN ETKİLERİNİN İN
VİTRO KOŞULLARDA İNCELENMESİ
Başak SANNA, Ayşen DURMAZ, Abdullah TULİ, Nurten DİKMEN
Çukurova Üniversitesi, Tıbbi Biyokimya, Adana
P. 073 / HOMOCYSTEINE, CYSTEINE AND N-ACETYL CYSTEINE
EFFECTS ON G6PD B+ AND G6PDMEDITERRANEAN ACTIVITY
UNDER IN VITRO CONDITIONS
Başak SANNA, Ayşen DURMAZ, Abdullah TULİ, Nurten DİKMEN
Biochemistry, Institute of Medical Sciences, Cukurova University, Adana
CONTENTS
Giriş: Glukoz-6-fosfat dehidrogenaz (G6PD) enzimi heksoz monofosfat şantının ilk
ve düzenleyici enzimidir. Enzim, glukoz-6-fosfat(G6P)’ın 6-fosfoglukanolaktona
dönüşümünü katalize ederken, NADP’ nin redükte NADP (NADPH) haline geçmesini
sağlamaktadır. G6DP eksikliği dünyada en sık rastlanan eritrosit enzim eksikliğidir
ve 400 milyondan fazla insanı etkilemektedir. Çukurova bölgesinde bazı yörelerde
%20 ye varan enzim eksikliği bildirilmiştir. Materyal ve Metod: Bu çalışmada farklı
derişimlerdeki (10 μM, 20μM, 50μM, 100μM, 500μM, 1000μM) Homosistein
(Hcy), Sistein (Cys), N-Asetil Sistein (NAC) ile Homosistein+ N-Asetil Sistein’in
G6PD aktivitesi üzerine olan etkisi incelenmiştir. Bu nedenle ilk olarak G6PD, anyon
değiştirici kolon kromatografisi yardımıyla enzim aktivitesinin normal olduğu bilinen
bir bireyin kanından kısmi olarak saflaştırılmıştır. Ayrıca G6PDAkdeniz mutasyonu
taşıdığı bilinen bir olgunun da enzimi aynı şekilde saflaştırılmış ve tiyol grubu (-SH)
içeren moleküllerin enzim aktiviteleri üzerine olan etkileri incelenmiştir. G6PD
saflaştırması Yoshida yöntemi kullanılarak, enzim aktivitesi ise Beutler yöntemi
kullanılarak ölçülmüştür. Sonuç ve Tartışma: Çalışma sonucunda Hcy’nin normal
enzim aktivitesini etkilemediği fakat çok düşük derişimlerde dahi G6PDAkdeniz
mutant enzimini %50 oranında inhibe ettiği gözlenmiştir. Cys ise normal enzim
aktivitesini etkilemezken çok yüksek derişimlerde mutant enzimi %80 inhibe etmiştir.
Antioksidan bir madde olan NAC, normal enzimde kısmi aktivite artışı yaparken,
mutantta yaklaşık %50 oranında inhibisyon yapmıştır. NAC + Hcy etkisi, NAC
etkisiyle paralellik göstererek normal enzimde kısmi aktivite artışı sağlarken mutant
enzimde inhibitör etki devam etmiştir. Hcy ve benzeri tiyol bileşiklerindeki derişim
artışlarının G6PDAkdeniz mutant enzimini inhibe etmesi, eritrositlerde hemolize
kadar giden yoğun oksidan etkiye bu moleküllerin de katkıda bulunabileceğini
düşündürmüştür.
Introduction: Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) enzyme is the first and
the regulatory enzyme of hexose mono phosphate shunt. G6PD enzyme functions
in catalyzing the oxidation of glucose-6-phosphate to 6-phosphogluconate, while
concomitantly reducing nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADP+ to
NADPH). G6PD defficiency is the most common human enzyme defect, being present
in more than 400 million people worldwide. Enzyme deficiency in the Çukurova region
of up to 20% have been reported in some areas. Material and Method: In this study,
we examined the effects of different concentrations (10 μM, 20μM, 50μM, 100μM,
500μM, 1000μM) of Homocysteine (Hcy), Cysteine (Cys), N-acetyl cysteine (NAC)
and Hcy + NAC on G6PD B+ and G6PDMediterranean activities. For this purpose,
G6PD B+ and G6PDMediterranean were partially purified, from individuals whose
enzyme activity is normal and who had G6PDMediterranean mutation respectively,
with the anion exchange chromatography. Then the thiol containing compound effects
on these enzymes were investigated. G6PD was purified with Yoshida method and the
enzyme activity was measured using the method of Beutler. Results and Discussion:
In this study it was observed that Hcy did not effect the activity of G6PD B+ but
it decreased the G6PDMediterranean activity by 50%. Also Cys did not effect the
G6PD B+ enzyme activity but it decreased the G6PDMediterranean activity by %80.
NAC, which is an antioxidant substance, increased the activity of G6PD B+ while it
decreased the mutant enzyme activity approximately 50%. NAC + Hcy effect showed
a parallel increase in the normal enzyme activity like NAC effect, while a partial
inhibitory effect on the mutant enzyme has continued. In brief, it was observed that
concentration increases in the Hcy and other thiol containing compounds inhibit
the G6PDMediterranean mutant enzyme activity. This result suggested that these
molecules may contribute to the oxidant effect in erythrocytes which causes to
hemolysis
Turk J Biochem, 2011; 36 (S2)
http://www.TurkJBiochem.com