23. Ulusal Biyokimya Kongresi Özel Sayısı - Türk Biyokimya Dergisi

XXIII. ULUSAL B‹YOK‹MYA KONGRES‹
29 Kasım - 2 Aralık 2011
Hilton Hotel - Adana
23. Ulusal Biyokimya Kongresi, Adana [23 rd National Biochemistry Congress, Adana / TURKEY]
İÇİNDEKİLER
P. 150 / PSEUDOMONAS HALOPHİLA’DA GLUTATYON
S-TRANSFERAZ AKTİVİTESİNİN BELİRLENMESİ VE
OPTİMİZASYONU
Ayşe ÇAKIR, Elif ÖZTETİK, Kıymet GÜVEN
Anadolu Üniversitesi, Biyoloji, Eskişehir
P. 150 / DETERMINATION OF GLUTATHIONE S-TRANSFERASE
ACTIVITY AND IT’S OPTIMIZATION IN PSEUDOMONAS
HALOPHILA
Ayşe ÇAKIR, Elif ÖZTETİK, Kıymet GÜVEN
Biology, Anadolu University, Eskisehir
CONTENTS
Bakteriyel GST, ksenobiyotiklerin biyodegredasyonu, kimyasal ajanlara karşı
savunma, oksidatif stres ve antimikrobiyal ilaç dirençliliği gibi çeşitli süreçlerde rol
oynamaktadır. Detoksifikasyondaki rollerinin yanı sıra bakteriyel GST, diklorometanın
biyotransformasyonu, lignin ve atrazin degradasyonu ve pentaklorofenolün indirgeyici
deklorinasyonu gibi birçok metabolik süreçte rol almaktadır. Bu çalışmanın amacı
halofilik bir bakteri olan Pseudomonas halophila DSM 3050’de GST aktivitesinin
belirlenmesi ve optimizasyonudur. Enzim ekstraksiyonu dondurma-çözme metodu
kullanılarak yapılmıştır. Toplam protein miktarı Lowry metoduna göre belirlenmiştir.
GST enzim aktivitesinin belirlenmesi, substrat olarak 1-kloro-2,4-dinitrobenzen
(CDNB) varlığında Habig ve Jakoby yöntemi kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Enzim
aktivitesi, deneylerin farklı tampon solüsyonları (potasyum fosfat, sodyum fosfat,
sodyum asetat ve Tris-HCl), farklı pH değerleri (6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0), farklı
protein miktarları (25, 50, 75, 100, 125, 150 μg), farklı sıcaklıklar (25, 30, 35 °C),
farklı CDNB konsantrasyonları (0.25, 0.30, 0.40, 0.50, 0.65, 0.75, 0.85, 1.0, 1.50,
2.0 mM) ve farklı GSH konsantrasyonlarında (0.25, 0.50, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 mM)
tekrarlanmasıyla spektrofotometrik olarak belirlenmiştir. Deneyler sonucu elde edilen
sonuçlar karşılaştırıldığında GST enziminin farklı koşullar altında farklı aktivite
gösterdiği görülmüştür. Enzimin optimum aktivite gösterdiği tampon sisteminin
pH’sı 6.5 olan Tris-HCl, optimum CDNB konsantrasyonun 1.0 mM ve optimum
GSH konsantrasyonunun 4.0 mM olduğu bulunmuştur. En yüksek reaksiyon hızı 25
°C’de saptanmıştır. Protein miktarının ise kullanılan diğer değişkenlere bağlı olarak
değişiklik gösterdiği gözlenmiştir.
Bacterial GST is available in various processes such as biodegradation of xenobiotics,
defense against chemical agents, oxidative stress and antimicrobial drug resistance.
In addition to its role in detoxification, bacterial GST is involved in many metabolic
processes, such as biotransformation of dichloromethane, degradation of lignin
and atrazin and reductive degradation of pentachlorophenol. The aim of this study
is determination and optimization of GST activities in a halophilic bacterium
Pseudomonas halophila DSM 3050. Enzyme extraction was carried out by freezethaw
method. Total protein amount was determined by Lowry method. Optimization
of GST enzyme activity was conducted by using Habig and Jacoby method in the
presence of 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB) as a substrate. The enzyme activity
was determined spectrophotometrically by re-conducting the experiments in different
buffer solution systems (potassium phosphate, sodium phosphate, sodium acetate
and Tris-HCl), at different pH levels (6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0), for different protein
amounts (25, 50, 75, 100, 125, 150 μg), at different temperatures (25, 30, 35 °C), in
different CDNB concentrations (0.25, 0.30, 0.40, 0.50, 0.65, 0.75, 0.85, 1.0, 1.50, 2.0
mM) and in different GSH concentrations (0.25, 0.50, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 mM). It was
found that the buffer system in which the enzyme showed the optimum activity was
pH 6.5 Tris-HCl, the optimum CDNB concentration was 1.0 mM and the optimum
GSH concentration was 4.0 mM. Maximum reaction rate was reached at 25 °C. It was
also seen that the protein amounts varied depending on the other variables used.
Turk J Biochem, 2011; 36 (S2)
http://www.TurkJBiochem.com