23. Ulusal Biyokimya Kongresi Özel Sayısı - Türk Biyokimya Dergisi

XXIII. ULUSAL B‹YOK‹MYA KONGRES‹
29 Kasım - 2 Aralık 2011
Hilton Hotel - Adana
23. Ulusal Biyokimya Kongresi, Adana [23 rd National Biochemistry Congress, Adana / TURKEY]
İÇİNDEKİLER
P. 176 / FARKLI MEMELİ HÜCRE HATLARINDA PROTEİN
NİTRASYONUNUN ARAŞTIRILMASI
Fadime AYDIN KÖSE, Petek BALLAR, Aysun PABUÇÇUOĞLU
Ege Üniveristesi Eczacılık Fakültesi, Biyokimya, İzmir
P. 176 / PROTEIN NITRATION INVESTIGATIONS IN DIFFERENT
MAMMALIAN CELL LINES
Fadime AYDIN KÖSE, Petek BALLAR, Aysun PABUÇÇUOĞLU
Biochemistry, Ege University Faculty of Pharmacy, Izmir
CONTENTS
Protein nitrasyonu; reaktif azot türleri (RNS) ile proteinlerin reaksiyonu sonucunda
gerçekleşen post-translasyonal bir modifikasyondur. Bu reaksiyonda, protein
yapısında yer alan tirozin artığının fenolik hidroksil grubuna orto konumunda
bir nitro grubunun eklenmesiyle, 3-nitrotirozin oluşur. Protein tirozin nitrasyonu,
proteinin fonksiyonunu değiştirebilen ve 50’nin üzerinde hastalıkla ilişkilendirilen
bir modifikasyondur. Bunlar arasında kardiyovasküler hastalıklar, diyabet, Parkinson
hastalığı, Alzheimer hastalığı sayılabilir. In vivo protein nitrasyonunun seçici bir süreç
olduğu düşünülmektedir. Bu olayda farklı nitrasyon ajanlarının varlığı, proteinin
yapısı, antioksidanlarla gerçekleşen ikincil reaksiyonlar, inflamatuvar hücrelerin
varlığı ve reaksiyonun gerçekleştiği hücre kompartmanları gibi çeşitli faktörler rol
oynamaktadır. Bu çalışmada nitrozatif stres artışına bağlı gelişen protein nitrasyonunun
hücrelerdeki etkilerinin incelenmesi amaçlandı. Bu doğrultuda; nitrasyon ajanı olarak;
peroksinitrit (ONOO-) ve peroksinitrit donörü olan 3-morpholinosydnonimine (SIN-
1) kullanılarak, üç farklı hücre hattında [insan embriyonik böbrek hücre hattı (HEK-
293), insan göğüs kanseri hücre hattı (MCF-7) ve insan akciğer kanseri hücre hattı (A-
549)], farklı koşullarda denemeler yapıldı. Protein nitrasyon düzeylerini incelemek
için Immünoblotlama yöntemi kullanıldı. ONOO- ile yapılan denemelerde, 3-NT
düzeyi 10 dakika inkübasyon sonrası, her üç hücre hattında kontrol grubuna göre
anlamlı derecede artmış bulundu. En yüksek 3-NT düzeyi ise HEK-293 hücrelerinde
belirlendi. Farklı çözücüler kullanılarak hazırlanan SIN-1 ile yapılanan çalışmalarda
ise 1, 2 ve 4 saatlik inkübasyon sonunda, 3-NT düzeyi sadece HEK-293 hücrelerinde
kontrol grubuna göre anlamlı derecede artmış olarak tespit edildi. Denemeler
sonucunda ONOO- ‘in her üç hücre hattında da, SIN-1 molekülüne göre, daha kısa
sürede ve daha yüksek düzeyde protein nitrasyonuna neden olduğu saptandı.
Protein nitration is a post-translational modification, which as a result of reaction
between reactive nitrogen species (RNS) and proteins. In this reaction 3-nitrotyrosine
(3-NT) is formed by a nitro group orto-substitution to phenolic hydroxyl group of
tyrosine residues in protein structure. Protein tyrosine nitration is a modification, which
can alter function of protein and has been associated with more than fifty diseases
including cardiovascular diseases, diabetes, Parkinson disease, Alzheimer disease. In
vivo protein nitration is thought to be a selective process. Various factors play a role in
this event such as the presence of different nitrating agents, secondary reactions with
antioxidants, existence of inflammatory cells and cell compartment where reaction
occurred. In this study aimed to investigate effects of nitrosative stress induced protein
nitration in cells. For this purpose, experiments were performed by using peroxynitrite
(ONOO-) and peroxynitrite donor, 3-morfolino-sydnonimine (SIN-1) as nitration
agent in three cell lines, with different conditions. In order to examine the level of
protein nitration Immunoblotting was performed. In studies used ONOO-, 3-NT level
was found significantly increased in all three cell lines compare to control group after
10 min incubation. The highest 3-NT level has been observed in HEK-293 cell line.
Experiments using SIN-1 prepared in different solvents, only HEK-293 cell lines was
showed a significant increased in 3-NT level compare to control group after 1, 2 and 4
hours incubation. Our data suggest that in all three cell lines, ONOO- induces protein
nitration in a higher level and faster than SIN-1.
Turk J Biochem, 2011; 36 (S2)
http://www.TurkJBiochem.com