CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

CONCEPCION y BARRIGA (1.985) obtienen un extracto antigénico a partir
de huevos embrionados de T. canis, lavándolos varias veces en solución sa-
lina y tampón fosfato a pH 7,2, suspendiéndolos en 10 ml del mismo tampón a
una concentración de unos 40.000 huevos/ml y homogeneizando varias veces a
20.000 r.p.m. . A continuación los sonican 15 veces durante 30 segundos y
extraen la suspensión sonicada a 49C durante 24 horas, centrifugan a 20.000
xg durante 30 minutos (realizando todo el proceso a 4QC, o en hielo) y uti-
lizan el sobrenadante como extracto de huevos. Finalmente determinan la
concentración proteica por el método de Folin—Lowry, (Lot-mv y col. 1.951)
utilizando seroalbúmina bovina (B.S.A.) como patrón.
ROMBERT (1.987) obtiene antígeno total de huevos embrionados de T.
canis. Para ello suspende los huevos en solución salina y los sonica.
Posterirmente centrifuga el producto resultante a 6.000 r.p.m. durante 30
minutos, utilizando el sobrenadante como antígeno y valorando el contenido
proteico mediante el método de BRADFORI> (1.976).
2.10.1.2.— ANTIGENO TOTAL LARVARIO
VIENS y col. (1.975) decortican huevos de T. canis con lejía domésti-
ca, lavan con P.B.S. pH 7,2 y homogeneizan. Obtienen así una mezcla de hue-
vos embrionados, huevos intactos y rotos, larvas libres y cubiertas vacias.
Lavan este producto varias veces en solucion salina y lo consideran
antígeno larvario.
CYPESS y col. (1.977) homogeneizan larvas de segundo estadio en tampón
borato 0,05 M, pH 9,6, centrifugan y utilizan el sobrenadante como
antígeno. Esta misma técnica es utilizada por DESOWITZ y col. (1.981).
ROIZUMI y col. (1.983) preparan extractos de larvas de T. canis. Des-
pués de cortarlas en trozos pequeños y homogeneizar en P.B.S., sonican el
homogeneizado a 20 KHz durante cinco minutos. Tras centrifugar, dializan el
sobrenadante frente a P.B.S.
NICHOLAS y col. (1.984) preparan antígeno a partir de larvas de T
canis procedentes de cerebros de ratones. Después de lavar con P.B.S.,
sonican añadiendo fluoruro de fenilmetilsulfonilo 2mM y ácido
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