CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

d) - Añadir la cantidad apropiada de TEMED y persulfato amónico, según
el protocolo referido en el punto b), para que comience la
polimerizacion.
e) — Cargar cuidadosamente el gel entre los cristales utilizando una
jeringa con aguja de 19 6, añadiéndolo sólo por uno de los lados
para evitar corrientes de conveccion.
e) - Colocar el peine elegido según el tamaño del pocillo deseado,
introduciéndolo de lado para evitar la formación de burbujas y
rellenar con ayuda de una jeringa.
f) — Dejar gelificar entre 30 y 40 minutos.
3.2.19.3.3.— Preparación de las muestras
a) — Diluir la muestra en proporción 1:1 en tampón de la muestra 2x.
b) — Añadir una gota de azul de bromofenol (0,01% en tampón de la
muestra 2x) y 5 ul de 2—mercaptoetanol (en el caso de geles en
condiciones reductoras) para muestras de 50 a 80 ul.
c) - Hervir en tubos Eppendorf durante tres minutos en baño de agua
(para las muestras a caracterizar en condiciones reductoras).
3.2.19.3.4.- Aplicación de las muestras
a) — Pasados los 30—40 minutos necesarios para la solídifiación del
gel de concentración, sacar el peine del mismo, eliminando los
restos de tampón que puedan quedar en las calles con papel de
filtro Whatman nQl.
b) — Dispensar las muestras en las posiciones establecidas previamen-
te, con ayuda de pipeta automática con micropunta, cargando de 50
a 80 ul por calle.
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