CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

SMITH y col. (1.983, c) lavan adultos en P.B.S. y homogeneizan en baño
de hielo. Después de solubilizar durante seis horas a 42C, centrifugan una
hora a 16.000 r.p.m. eliminando el sedimento.
TORCí y col. (1.983) utilizan simples extractos salinos de adultos de
T. canis y KOIZUMI y col. (1,983) emplean el mismo método de extracción que
el utilizado para larvas de segundo estadio.
TANAKA y col. (1.983) preparan antígeno de T. canis a partir de fluido
corporal de helmintos adultos. Realizan una punción del extremo posterior y
filtran el fluido a través de papel Whatman nQ 1. Después de dializar fren-
te a agua destilada, liofilizan el antígeno.
CONCEPCION y BARRIGA (1.985) lavan los helmintos varias veces en solu-
ción salina y tampón fosfato pH 7,2, los cortan y suspenden 5 g. de mate-
rial en 20 ml del tampón anterior. A continuación, homogeneizan varias ve-
ces en una batidora a unas 20.000 r.p.m. y, después, sonican 10 veces du—
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rante 60 segundos a 185 vatios/cm . Extraen y centrifugan por el mismo sis-
tema que para la obtención del extracto de huevos embrionados, valorando
asimismo el contenido proteico por el método de Folin—Lowry, (LOWRY y col.
1.951).
GUNASEELAN y col. (1.986) obtienen antígeno, por el método descrito
por CYPESS y col. (1.977), a partir de adultos de T. canis a los que pre-
viamente lavan repetidas veces con solución salina.
PETITHORY y col. (1.987) recogen adultos y lavan varias veces con so-
lución salina. Los fragmentan mediante seis sucesivas congelaciones y des—
congelaciones, Para la extracción del antígeno hidrosoluble utilizan cloru-
ro sádico al 1% preparado con agua bidestilada y finalmente dializan la so-
lución antigénica durante 24 horas a 49C y liofilizan.
2.10.2. - OBTENCION DE ANTíGENO EXCRETOR ¡SECRETOR LARVARIO
Fue DE SAVIGNY en 1.975 el que obtuvo por primera vez antígeno E/S
cultivando larvas de segundo estadio de T.canis. Para ello dispersa las
larvas recien eclosionadas y purificadas en medio Mínimo Esencial de Eagle
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