CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

Lavar tres veces con P.B.S.-Tween 20 para eliminar el anticuerpo
monoclonal que no hubiera reaccionado.
d) - Adición del conjugado. Añadir 100 ul/pocillo de inmunoglobulinas
de cabra anti-inmunoglobulinas de ratón, marcadas con peroxidasa
a la dilución apropiada, en P.B.S.-Tween 20, B.S.A. al 0,1%.
Incubar durante una hora a 3790.
Lavar tres veces con P.B.S.—Tween 20 para eliminar las
anti-inmunoglobulinas marcadas que no hubieran reaccionado.
e) - Adición del sustrato. Añadir 100 ul/pocillo de 0—fenilenodiamina
en tampón citrato-fosfato con peróxido de hidrógeno, en las
proporciones indicadas anteriormente (3.2.18.1.). Dejar actuar
a temperatura ambiente y en la oscuridad hasta que los blancos
empiezan a tomar color.
U - Frenado de la reacción. Añadir 50 ul/pocillo de SO H 3 N
42
g) - Lectura. Leer la D.O. a 492 mi del producto final coloreado.
Nota: Una porción de la placa se utilizo como control de B.S.A., es
decir, simultáneamente se realizó un control de E.L.I.S.A. sin tapizar con
antí—irimunoglobulinas de ratón, para asegurar que la reacción colorimétrica
era debida a la formación del complejo anti—inmunoglobulína de raton-anti-
cuerpo monoclonal TC—1 y no a reacciones inespecíficas. Los resultados se
expresan como D.O..
3.2. 19. - OBIENCION DE ANTICUERPOS ANTI-IDOTIPO FRENTE AL
ANTICUERPO HONOCLONAL TC-1
3.2.19.1.- OBTENCION DE LOS FRAGMENTOS F(ab’) 2 DEL ANTICUERPO
MONOCLONAL 10-1
Los fragmentos F(ab’)2 del anticuerpo monoclonal TC-1 se obtuvieron
mediante un tratamiento de digestión pépsica.
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