CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

3.2.3.1.— ECLOSION DE HUEVOS Et4BRIONADOS MEDIANTE PERLAS DE VIDRIO
Los huevos embrionados con larvas de segundo estadio en su interior,
se lavaron tres veces con solución salina estéril al 0.85%. Se eliminó el
sobrenadante y se trató con una mezcla a partes iguales de hipoclorito só—
dico al 2% e hidróxido sódico al 2%, en agitación constante a 379C durante
40 minutos, eliminándose, de esta forma, la cubierta externa.
Inmediatamente después se lavaron de nuevo cinco veces con solución
salina estéril al 0,85%, mediante centrifugación a 1.500 r.p.m. durante
cinco minutos, para eliminar los restos de la mezcla decorticante. A con-
tinuación se resuspendieron en 11.B.S.S. estéril con perlas de vidrio esté-
riles de 3 mm de diámetro en agitación rotatoria, a temperatura ambiente,
durante 30 minutos para que se produjera la eclosión.
3.2.3.2.- SEPARACION DE LARVAS VIABLES
3.2.3.2.1.— Purificación de lanas mediante solución se,nisatnrada de
sacarosa
Se ensayó el método tal y como se ha descrito anteriormente en el
apartado de concentración y limpieza de huevos procedentes de heces.
Las larvas vivas se recogieron en el sedimento, mientras que los hue-
vos sin embrionar, los no eclosionados, y las larvas muertas quedaron en la
interfase. El sedimento donde se encontraban las larvas vivas se lavó con
11.B.S.S. para eliminar los restos de sacarosa.
3.2.3.2.2.- Purificación de larvas mediante separador de linfocitos
a) - Añadir cuidadosamente con la ayuda de una pipeta Pasteur, 4 ml de
H.B.S.S. con las larvas recién eclosionadas, sobre 3 ml de
separador de linfocitos en un tubo de centrífuga de 10 ¡nl,
evitando la mezcla entre el H.B.S.S. y el separador de
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