CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

añaden los sueros diluidos en P.B.S.—Tween 20 en diluciones seriadas desde
1/loo, incuban una hora a 379C, y visualizan los anticuerpos ligados con
anti-inniunoglobulinas marcadas con peroxidasa, utilizando con cromógeno
o—fenilenodiamina o acido 2,2—azino—dí—3—etil-benzotiazolin sulfónico, le-
yendo espectrofotométricanente a 492 ¡ini ó 405 ¡ini respectivamente.
El mismo autor utiliza un E.L.I.S.A. de inhibición, para la detección
de anticuerpos frente a determinados epítopos del antígeno FIS, basándose
en la técnica empleada por CRUISE y col. (1.981). Tapizan las placas con
antígeno FIS como se describe anteriormente, postapizando con leche desna-
tada en polvo al 5% en P.B.S. durante 30 minutos. Tras el lavado, añaden
los sueros a la dilución 1/20 en P.B.S.—Tween 20 e incuban dos horas a
37QC. A continuación incuban durante toda la noche a temperatura ambiente
con el anticuerpo monoclonal conjugado con peroxidasa. Calculan el porcen-
taje de inhibicton como la 0.0. obtenida con el anticuerpo inonoclonal mar-
cado en ausencia de suero, menos la D.C. obtenida por presencia del suero,
dividido entre la primera y multiplicado por cien.
HUWER y col. (1.989) utilizan E.L.I.S.A. con antígeno somático de lar-
vas de segundo estadio de ‘1. canis diluido en tampón carbonato 0,1 M a 10
ug/ml. Tras la incubación de 200 ul de la dilución del suero humano, añaden
conjugado de conejo anti—ininunoglobulinas humanas marcado con peroxidasa a
la dilución 1/1.000, utilizando como sustrato específico tolidina en
dímetilformamida disuelta en tampón aceto/acetato pH 3,7 al que añaden pe-
róxido de hidrógeno. Tras la incubación a temperatura ambiente, frenan a
los 15 minutos, leyendo la reaccion espectrofotométricamente.
INOUE y TSUJI (1.988) emplean un E,L.I.S.A. con tres tipos de antígeno
de ‘1. canis (extracto de adultos, extracto larvario y extracto de huevos
embrionados) para el diagnóstico de la I.M.V.. Como concentración standard
de antígeno utilizan 20 ug/ml, como conjugado anti—TgG humanas marcadas con
peroxidasa y como sustrato o—fenilenodiamina al 0,01% con un 0,003% y 0,05%
de peróxido de hidrógeno respectivamente, para sueros a la dilución 1/100 y
para sueros a la dilución 1/1.000.
LJUNGSTROM y VAN KNAPEN (1.989) miden anticuerpos anti-Toxocara en
E.L.T.S.A. por el método descrito por VAN KNAPEN y col. (1.983) utilizando
antígeno EIS. Añaden los sueros a la dilución 1/100 utilizando como
111