CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

3.2.19.2.— AISLAMIENTO, CARACTERIZACION Y PURIFICACION DE LOS
FRAGMENTOS F(ab’) 2 DEL ANTICUERPO MONOCLONAL 10-1
a) — Dializar a 490 las muestras de anticuerpo monoclonal 10—1, dige-
rido y sin digerir (3.2.19.1.), frente a tampón P.B.S. 2x durante
toda la noche, tampón P,B.S. 1,5x durante cuatro horas y tampón
P.B.S. lx durante toda la noche.
b) — Las muestras, digerida (t=final) y sin digerir (t0), se someten
a electroforesis en SDS—PAGE (según método de LAEMMLI, 1.970) en
condiciones no reductoras y reductoras, a la concentración
adecuada de gel.
c) — Si se detectan fragmentos de bajo peso molecular, purificar a
través de una columna de ultragel ACA 44, (tamaño = 40 cm x 1,6
cm, límite de exclusión 200.000 D).
d) — Lavar la columna con tampón P.B.S. 2x, azida sódica al 0,02%,
pasando a continuación la muestra.
e) — Eluir con tampón P.B.S. 2x, azida sódica 0,02%, recogiendo
aproximadamente 2 ml/tubo.
f) — Caracterizar las fracciones seleccionadas en SDS—PAGE en
condiciones no reductoras y reductoras.
g) — Si en el gel se aprecian bandas correspondientes al anticuerpo
monoclonal TC—1 sin digerir, concentrar la muestra obtenida tras
la mezcla de las fracciones anteriormente seleccionadas, mediante
sistema de Amicon Centriprep 30, (sistema de concentración para
volumenes de 5 a 15 ml hasta 0,5—0,7 mí, con un corte de membrana
de 30.000 D) siguiendo las instrucciones del fabricante.
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