CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

SUGANE y OSHIMA (1.984, b) introducen la modificación de incubar cul-
tivos en atmósfera de anhídrido carbónico al 5% a 379C, determinando la
concentración proteica por el método de LOt-ffiY y col. (1.951). Este mismo
método es utilizado por MAIZELS y MEGHJI (1.984), MAIZELS y col. (1.984),
iENKINS y RICKARD (1,984) y ROBERTSON y col. (1.989).
NICHOLAS y col. (1.984, 1.986) utilizan el medio de Dubelcco, modifi-
cado por Bagle, aumentando la proporción de anhídrido carbónico al 10% y
eliminando las sustancias de bajo peso molecular mediante ultrafiltración
en Amicon.
SPEISER y GOTTSTEIN (1.984) introducen una diálisis frente a agua des-
tilada y una ultrafiltración previas a la concentracion.
GLICKMAN y col. (1.985) y GLICKMAN y SCHANTZ (1.985) modifican el mé-
todo de DE SAVIGNY (1.975) cultivando las larvas en medio RPMI—1640, pH
3
7,2, suplementado con glutamina, a una concentración de 10 larvas/ml. In-
cuban en estufa con un 5% de anhídrido carbónico y una humedad relativa del
95%. Tras dializar el medio frente a tampón Tris 0,05 M de pH 8 con azida
sódica al 0,02% y concentrar mediante ultrafiltración, determinan la con-
centración de proteinas a 280 mii frente a un patrón de B.S.A. . Posterior-
mente, BOI~NAN y col. (1.987) utilizan el mismo método de obtención de
antígeno B/S, pero filtrando el medio recolectado a través de papel Whatman
n~¿ 1 y dializando frente a P.B.S. 0,01 M de pH 7,2. También concentran por
ultrafiltración, utilizando un límite de exclusión de 10.000 U, hasta lle-
gar a obtener 2-10 mg/proteina/ml, valorados del mismo modo.
GUILLEN y col. (1.986, a) suspenden larvas viables en medio Mínimo
Esencial de Fagle con sales de Farle, con bicarbonato a 2 gil y glutamina
2mM, incubándolas a 37§~C. Semanalmente recogen los sobrenadantes de los
cultivos y, tras dializar frente a P.B.S. , valoran su contenido proteico
mediante el método de BRADFORI> (1.976). El mismo método es utilizado por
BRUNEILO y col, (1.986), quienes obtienen concentraciones de 70 ug/ml de
antígeno, almacenándolo a —209C hasta su uso.
MEGHJI y MAIZELS (1.986) y MAIZELS y col. (1.987) cultivan las larvas
a una concentración de 4.000 larvas/ml en medio RPMI—1640, suplementado con
glucosa al 1% y conteniendo penicilina, estreptomicina y HEPES. Incuban a
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