CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

conjugado anti-inmunoglobulinas humanas marcadas con peroxidasa y como sus-
trato ácido 5—aminosalicílico en peróxido de hidrógeno, considerando como
límite de positividad una D.0. de 0,300 que coresponde a la D.0. media del
suero negativo +1— tres veces la desviación estándar,
UGA y col. (1.990) investigan anticuerpos anti—Toxocara en E.L.I.S.A.,
tapizando con antígeno FIS a 5 ng/ml. Utilizan los sueros a la dilución
11100, como conjugado anti-IgG humanas marcadas con peroxidasa a la dilu-
ción 1/1.000, midiendo el resultado de la actividad enzimática utilizando
como sustrato ácido 2,2’—azino—di—3—etil—benzotiazolín sulfónico. Leen la
absorbancia a 410 mu y expresan los resultados como el cociente entre la
1.O. a 410 mii del suero problema y la media de la D.0. a 410 tun del suero
control negativo (T/N). Consideran como fuertemente positivos (++) los va-
lores de T/N mayores o iguales a 11,4; como positivos (+) los valores supe-
riores o iguales a 3,3; como dudosos (+1—) los comprendidos entre 3,3 y 1,8
y como negativos (—) los inferiores a 1,8.
MATSUMURA y col. (1.987) describen la utilidad del E.L.I.S.A. “dot” en
la toxocarosis canina. Añaden 100 ul de antígeno E/S a 100 ng/ml. bloquean
con 50 ml de B.S.A. al 2% en P,B.S. y diluyen los sueros (50 nl) a la
1/160. Tras añadir anti-IgG conjugadas con peroxidasa y 4—cloro—1—naftol
con peróxido de hidrógeno como sustrato. observan la reaccion coloreada
eliminando el sustrato por reducción de la presión. Consideran reacción
positiva el desarrollo de puntos azules bien definidos en observacion
visual, realizando la medida cuantitativa en un densitómetro.
CONDE—GARCIA y col. (1.989) analizan sueros en busca de anticuerpos
anti—Toxocara mediante la técnica F.L.I.S.A. “doC’ descrita por PAPPAS y
col. (1.983), quienes tras fijar 1 nl de antígeno a discos de nitrocelulosa
estabilizándolo por secado durante 10 minutos a 56 ~C, utilizan como agente
bloqueante T.B.S. en B.S.A. al 5%. A continuación añaden diluciones seria-
das de los sueros en T.B.S.—B.S.A. al 1%. Tras los lavados correspondientes
con Nonidet-P40 al 0,05% en T.B.S. utilizan anti—IgG humanas conjugadas con
peroxidasa a la dilución 1/100 en T.B.S.—B.S.A. al 1% (pH 7,4). Como sus—
trato emplean 4—cloro—1—naftol disuelto en metanol anhidro a 3 mg/mí, al
que se añaden inmediatamente antes de su uso, 10 ml de T.B.S. y 4 nl de
peróxido de hidrógeno al 30% por cada 2 ml de 4—cloronaftol. Consideran
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