CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

2.12.1.1.3.- Detección de antígenos circulantes
MATSUMURA y col. (1.984) utilizan un F.L.I.S.A. “sandwich” para detec-
tar antígenos circulantes en perros infestados por T.canis, utilizando los
sueros a la dilución 1/5 y absorviendo previamente con extracto de A.
lumbricoides, E. hepática y Dirofilaria inmitis
BOWI4AN y col. (1.987) investigan los niveles de antígenos circulantes
en ratones mediante E.L.I.S.A. , con la ayuda de un suero policlonal de co-
nejo anti-T. canis. Revelan el sistema mediante el mismo suero marcado con
biotina y utilizan una curva patrón para evaluar los niveles de antígeno
detectado.
ROBERTSON y col. (1.988) utilizan un E.L.I.S.A. o un R.T.A. ‘sandwich’
con un anticuerpo monoclonal Tcn-2 (IgN), (MAIZELS y col. 1.987), para la
detección de antígeno FIS circulante en sueros murinos, de conejo, de pe-
rros y humanos. Incuban las placas toda la noche a temperatura ambiente con
50 ul del anticuerpo monoclonal purificado a 5 uglmí o con las ascitis di-
luidas a 10 ug/ml en tampón carbonato 0,06 14, pH 9,6. Por otro lado, y en
placas aparte, incuban 25 ul de las muestras de suero diluidas a 1/10 en
P.B.S.—Tween 20 al 0,05%, con 25 ul del anticuerpo monoclonal marcado con
iodo radioactivo (6 x ~ c.p.m./pocillo) (R.I.A.) o con peroxidasa
(E.L.I.S.A.) diluido a 1/500, durante dos horas a 3700. A continuación lo
transfieren a la placa previamente tapizada con el anticuerpo monoclonal e
incuban toda la noche a temperatura ambiente. Tras lavar convenientemente
las placas con P.B.S.-Tween 20, revelan el sistema mediante lectura con un
contador gamma (R.I.A.) o con o—fenilenodiamina o ácido 2,2—azino—
di-3—etil—benzotiazolín sulfónico, leyendo espectrototométricamente a 490 y
405 ¡ini respectivamente (F.L.I.S.A.).
Para detectar el antígeno sérico complejado por las inmunoglobulinas.
ROBFRTSON y col. (1.988) disocian los inmunocomplejos mediante tratamiento
con EDIA, según WEII y col. (1.985). Mezclan las muestras de suero con un
volumen igual de FInA 0,2 14 a pH 8, hierven durante cinco minutos, centri-
fugan a 14.000 xg durante cinco minutos y emplean el sobrenadante resultan-
te en E.L.I.S.A. “sandwich” para la detección del antígeno, utilizando el
anticuerpo monoclonal Tcn—2 del modo descrito anteriormente.
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