CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

etilendiaminotetrácetico (EDTA) 2 mM para evitar la proteolisis. Tras cen-
trifugar, recogen el sobrenadante y determinan la concentración proteica
espectrofotométricamente a 280 mu.
RIERA y col. (1.987, a) obtienen antígeno total larvario de T. canis
por sonicación de larvas de segundo estadio, siguiendo la pauta recomendada
por el Centre for Diseases Control de Atlanta (SCHANTZ).
2.10.1.3.- ANTíGENO TOTAL DE ADULTOS
IZZAT y OLSON (1.970) preparan antígeno total de adultos de T. canis
por el método de IIUNTLEY y MORELAND (1.963). Lavan los adultos en solución
salina estéril y homogeneizan en batidora con P.E.S. 0,15 N, pH 7,2, duran-
te 10 minutos. Extraen toda la noche a 5s=C, liofilizan y conservan a —2OQC.
También utilizan el método de IVEY (1.965), que es similar al anterior,
hasta la extracción a 5~C. A partir de este paso realizan dos
centrifugaciones, una a 1.300 xg durante 90 minutos, y otra de 30 minutos a
10.000 xg. Tras liofilizar, el fluido sobrenadante lo conservan a —20QC.
ENAYAT y PEZESHKI (1.977) preparan antígeno total de T. canis mediante
homogeneización a 49C, obteniendo dos extractos. El sobrenadante recogido
tras el centrifugado constituye el primer extracto antigénico; a continua-
ción resuspenden el sedimento en P.E.S. y, tras sonicar y centrifugar, re-
cogen el sobrenadante que constituye el segundo extracto antigénico.
CYPESS y col. (1.977) utilizan el mismo método de obtención que para
extracto de huevos embrionados y larvas de segundo-estadio.
El proceso de delipidación fué introducido por WELCH y DOBSON (1.978),
quienes procesan los helmintos de la siguiente manera: lavan en solución
fisiológica, cortan en piezas y homogeneízan. Tras fragmentar la pasta re-
sultante por sonicación, delipidan con n—hexano, centrifugan y recogen el
sobrenadante realizando- todo el proceso a 4QG.
Este mismo método sigue siendo: - utilizado posteriormente por WELCH y
col. (1.979, 1.983).
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