CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

minaron en lo posible haciendo pasar el suero por una columna de Sepharosa
4B activada con bromuro de cianógeno a la que se habían fijado
inmunoglobulinas de ratón.
forma:
3.2.19.6.1.1.- Montaje de la columna y acoplamiento de
inmunoglobulínas de ratón.
Para el montaje de la columna de afinidad se procedió de la siguiente
a) - Pesar 2 g. de Sepharosa 4B activada con bromuro de cianógeno
(Pharmacia) y añadir 10 ml de ClH 1 mM (1 g.de Sepharosa
proporciona unos 3,5 ml de gel). Agitar cuidadosamente.
b) — Traspasar el gel a la columna, colocando placa porosa en el fondo
para evitar su pérdida y mantener en agitación rotatoria durante
15 minutos a 496.
c) — Una vez hinchado convenientemente el gel, lavar la columna con
200 ml de CíE 1 mM.
d) - Pasar aproximadamente 50 ml de tampón de acoplamiento (CO ENa
3
0,1 M pH 8,3 conteniendo dNa 0,5 M) para equilibrar la columna a
pH 8,3, controlando el pH de salida.
e) - Resuspender la muestra de proteinas (inmunoglobulinas de suero
de ratón precipitadas con S0 4(NH4)2) en tampón P.B.S., calculando
de 5-10 mg de proteina por ml de gel y de 1-5 mg de proteina por
ml de tampón.
f) — Dializar frente a tampón de acoplamiento (CO3HNa 0,1 M, pH 8,3
conteniendo CíNa 0,5 M), toda la noche a 490 y en agitación.
g) - Añadir la solución de proteinas a la columna y mantener en
agitación rotatoria toda la noche a 496 o dos horas a temperatura
ambiente.
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