CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

3.2.14. - PREPARACION DE LOS ANTICUERPOS HONOGLONALES
Los anticuerpos monoclonales 10—1 y 10—2 se prepararon a partir de los
hibridomas secretores (AGUILA y col., 1.988) que se habían mantenido con-
gelados en nitrógeno liquido.
3.2.14.1.— DESCONGELACION DE CELUIAS
a) - Preparar en un tubo para cultivo de tejidos, aproximadamente 9 ml
de medio RPMT—1640 completo y conectar el baño de agua.
b) — Sacar el vial a descongelar del nitrógeno líquido.
c) - Descongelarlo introduciéndolo en un baño de agua a 3790. Cuando
sólo quede un cristal de hielo de unos 3 mm, sacar el vial del
baño y limpiarlo exteriormente.
d) — Recoger el contenido del vial con una pipeta de 1 ¡nl y pasarlo al
tubo preparado con el R?MI—1640 completo.
e) — Centrifugar durante 10 minutos a 1.000 r.p.m. y 2090.
f) - Eliminar el sobrenadante aspirándolo con una pipeta Pasteur
conectada al vacio.
g) — Resuspender en el volumen necesario de RPMI—1640 completo para
que las células alcancen la fase exponencial de crecimiento.
3.2.14.2.- MANTENIMIENTO DEL HIBRIDOMA
Los híbrídomas secretores de anticuerpos monoclonales se mantuvieron
en crecimiento exponencial en medio RPMI—1640 completo, utilizando botellas
de cultivo 1—75. Se mantuvieron a 37=~C en estufa con un 7% de CO2~ durante
el tiempo necesario para obtener el ndxnero de células a inocular a los ra-
tones.
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