CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

3.2.20.3.3.- Posible utilización de los anticuerpos anti—idiotipo coma
réplica idiotípíca del antígeno excretor—secretor
larvario: Aplicación en la detección de anticuerpos
específicos en suero marino mediante E.L.I.S.A
3.2.20.3.3.1.- Ensayos directos
La posible utilización del suero anti—ídiotípico para la detección de
anticuerpos específicos en suero murino, mediante E.L.I.S.A., se ensayó
siguiendo la metodología habitual descrita en al apartado 3.2.18.1., pero
tapizando las placas con el suero anti-idiotípíco a 10 ug/ml y ensayando
los sueros murinos a distintas diluciones.
3.2.20.3.3.2.- Ensayos de inhibición
a) — Tapizar las placas con 50 ul de Proteina A-Sepharosa 4B a 5
ug/ml, diluida en tampón carbonato pH 9,6 durante toda la noche a
496.
b) — Postapizar con 50 ul de B.S.A. al 1% en P.B.S. durante dos horas
a 3796.
c) — Sensibilizar las placas mediante la adición de 50 ul del suero
anti—idiotípico diluido en P.B.S.—Tween 20, B.S.A. al 0,1%,
dejándolo actuar durante toda la noche a 496.
d) — Añadir 50 ul de suero de conejo negativo al 1% en P.B.S.—Tween
20, B.S.A. al 0,1%, dejándolo actuar durante una hora a
temperatura ambiente.
e) — Añadir 50 ul de suero murino negativo al 1% en P.B.S.—Tween 20,
B.S.A. al 0,1%, e incubar durante una hora a temperatura ambien-
te.
f) — Añadir 50 ul de los sueros murinos positivos (anti—Toxocara) y de
los correspondientes sueros murinos control negativos a ensayar,
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