CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

PARSONS y GRIEVE (1.990, a) estudian el efecto de la dosis de huevos
embrionados y del genotipo del hospedador sobre la retención larvaria hepá-
tica en la toxocarosis murina. Anestesiados los ratones, los sacrifican por
dislocación cervical y recogen el hígado sobre una placa de Petri que con-
tiene 10 ml de P.B.S. 0,01 M (pH 7,2), desmenuzándolo cuidadosamente. Lo
transfieren a un recipiente que contiene 40 ml de una solución de pepsina
clorhídrica (pH 1,5) formada por un 0,5% P/V de pepsina porcina y un 0,26%
de ácido clorhídrico, con tres gotas de octanol, batiendo durante 10 segun-
dos y evitando la homogeneización prolongada. Posteriormente transfieren el
homogeneizado a un Erlenmeyer de 250 ml completando con la solución de pep-
sina hasta un volumen final de 100 mí, incubando en un agitador con baño de
agua a 379C. Tras 6—8 horas de incubación, centrifugan a 1.000 xg durante
cinco minutos y resuspenden el sedimento en solución de pepsina—clorhídrica
recién preparada hasta un volúmen de 50 ml. Después de redigerir la suspen-
sión tras 20—24 horas de incubación, centrifugan del mismo modo y
resuspenden el sedimento en un volúmen final de 4-5 mí, colocándolo en un
portaobjetos y contando el número total de larvas al microscopio.
PARSONS y GRIEVE (1.990, b) utilizan el método anteriormente indicado
para recuperar larvas de T. canis de hígado, pulmones, cerebro. mesenterio
(incluido páncreas y nódulos linfáticos mesentéricos) y músculo esqueléti-
co.
2.7.1.1.3.— Método del “spin
El método del “5pm” es una técnica donde los tejidos son homogeneiza-
dos, filtrados y centrifugados para recuperar las larvas de los mismos.
JOHNSTONE y col. (1.978) deducen, por comparación de porcentajes de recupe-
ración, que se trata de un sistema más eficaz que el Baermann y la diges-
tión pépsica para la recuperación de larvas de Ascaris suum del hígado y
pulmones de ratones C57BL/6 infestados experimentalmente. Sacrifican los
animales por dislocación cervical y sumergen hígado y pulmones en solución
salina; tras homogeneizar cada órgano por separado en una batidora a 17.000
r.p.m. durante 20 segundos en 40 ml de solución salina con citrato y dos
gotas de octanol como antiespumante, filtran por triple gasa estéril y la-
van tres veces en solución salina con citrato. El primer lavado implica
centrifugar a 1000 xg durante 60 segundos y para el segundo y el tercer
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