CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

Lavar tres veces con P.B.S.—Tween 20 para eliminar los anticuer-
pos deficientemente fijados y los no fijados.
b) - Postapizado. Añadir 250 ul/pocillo de B.S.A. al 0,1% en P.B.S. e
incubar una hora a 3790,
Lavar tres veces con P.B.S.—Tween 20 para eliminar los restos de
B.S,A..
c) - Adición del suero. Añadir 100 ul/pocillo de los sueros problema y
controles a la dilución 1/25 en P.B.S.—Tween 20, B.S.A. al 0,1% y
dejar actuar durante tres horas a 3720. El antígeno, presente en
los inmunocomplejos, reaccionara con sus anticuerpos específicos
fijados previamente a la placa.
Lavar tres veces con P.B.S.—Tween 20 para eliminar los restos de
la muestra no fijados y los antígenos que no hayan reaccionado.
d) — Adición del conjugado. Añadir innnmoglobulinas de conejo
anti-inmunoglobulinas de ratón conjugadas con peroxidasa, dilui-
das en P.B.S.—Tween 20, B.S.A. al 0,1%. Se añaden 100 ul/pocillo
y se deja actuar durante una hora a 3790. Estos anticuerpos
marcados reaccionan con los anticuerpos presentes en los
inmunocomplejos previamente insolubilizados.
Lavar tres veces con P.B.S.—Tween 20 para eliminar las
anti-inmunoglobulinas que no hayan reaccionado.
e) - Adición del sustrato. Añadir 100 ul/pocillo de o-tenilenodiamina
en tampón citrato-fosfato con peróxido de hidrógeno, en las
proporciones indicadas anteriormente (3.2.18.1.). Dejar actuar
a temperatura ambiente y en la oscuridad hasta que los blancos
empiecen a tomar color.
f) - Frenado de la reacción. Añadir 50 ul/pocillo de SO II 3 N
g) - Lectura. Leer la D.O. a 492 rin del producto final coloreado.
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