CONTRIBUCION A LA BIOLOGIA E INMUNOLOGIA DE Toxocara ...

minutos y revelar por el sistema habitual (3.2.18.).
3.2.20.3.1.2.— Mediante microprecipitación lanraria
a) — Tapizar placas de cultivo de tejidos de 96 pocillos con B.S.A. al
1%, añadiendo 250 nl/pocillo, incubar en estufa a 3796 durante
dos horas, lavar con P.B.S. y dejar secar.
b) - Incubar en baño de agua a 3796 y por duplicado, con un 1% de
suero negativo de ratón en H.B.S.S., los siguientes reactivos:
— Diluciones dobles seriadas de los anticuerpos monoclonales TC—1 y
TC—2 sólos, o con una concentración constante del suero
anti-idiotípico.
— Diluciones dobles seriadas de los controles murinos, positivo y
negativo, sólos, o con una concentración constante del suero
anti—idiotípico.
- Controles de placa y de viabilidad larvaria (H.B.S.S. , suero
anti—idiotípico y sueros murinos positivo y negativo).
c) - Una vez incubados, centrifugar a 15.000 r.p.m. durante dos minu-
tos y recoger el sobrenadante.
d) — Añadir 100 ul/pocillo de cada dilución en la placa de cultivo.
e) - Añadir a cada pocillo 20 ul de una suspensión de larvas de T.
canis recién eclosionadas, a una concentración de 20—25
larvas/pocillo.
f) — Incubar en estufa a 3796 y realizar la lectura mícroscópicamente
a las 24 y 48 horas.
g) — Para la interpretación de los resultados seguir el siguiente
criterio de cuantificación:
O : ninguna larva con precipitados.
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